Fd-谷an酸合成酶(Fd-GOGAT)试剂盒,微板法

Fd-谷an酸合成酶(Fd-GOGAT)试剂盒,微板法

Fd-谷an酸合成酶(Fd-GOGAT)试剂盒,微板法

一、产品简介： 谷*酸脱氢酶广泛分布于生物体中，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作 用。其辅酶是 NADH 或 NADPH，在动植物种两种辅酶都有存在，而以 NADH-谷*酸脱氢 酶（EC 1.4.1.2）活力为主。 本试剂盒提供一种快速灵敏的检测方法，样品中的 NADH-谷*酸脱氢酶特异性作用于底 物谷*酸并产生 NADH，同时与显色剂反应生成黄色物质，该物质在 450nm 处有最大吸收 峰，进而得到 NADH-GDH 的酶活性大小。 二、试剂盒的组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体70mL×1瓶 4℃保存 试剂一 液体10mL×1瓶 4℃保存 浓度为1M 试剂二 液体5mL×1瓶 4℃保存 试剂三 液体2.2mL×1支 4℃保存 标准品 粉剂mg×1支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 注：粉剂量在 mg 级别，使用前用手甩几次或者进行离心，打开直接加入要求的试剂即可。 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、 研钵、冰和蒸馏水。 四、NADH-谷*酸脱氢酶（NADH-GDH）活性测定： 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 10min，取上清 液，置冰上待测。（或按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取） ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液； 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。（或按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL） 为 500~1000：1 的比例进行提取） ③ 液体样本：直接检测。 2、上机检测： ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。 ② 在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 提取液 320 试剂一 200 试剂二 80 样本 160 试剂三 40 混匀，立即 450nm 下读取 A1 值，15min 后读取 A2 值。ΔA=A 2-A1。