产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 微板法 > 肌酸激酶(CK)试剂盒,微板法

肌酸激酶(CK)试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-20

简要描述:

肌酸激酶(CK)试剂盒,微板法
肌酸激酶(CK,EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉及脑等组织中,能可逆地催化 肌酸与 ATP 之间的转磷酰基反应

肌酸激酶(CK)试剂盒,微板法

肌酸激酶(CK)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒说明书 (货号:WS5580W 微板法 96 样) 一、产品简介: 肌酸激酶(CKEC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉及脑等组织中,能可逆地催化 肌酸与 ATP 之间的转磷酰基反应,在能量运转、肌肉收缩和 ATP 再生中有重要作用。 CK 催化磷酸肌酸和 ADP 生成肌酸和 ATP,通过添加的己糖激酶与 6-磷酸葡萄糖 脱氢酶复合体,依次催化 ATP 的水解与并伴随着 NADPH 的生成,通过检测 NADPH 340nm 处吸光值的增加即可得出 CK 酶活性的大小。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂×1 4℃保存 临用前甩几下,使粉剂落到底部, 再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。 试剂二 粉剂×1 -20℃保存 临用前甩几下,使粉剂落到底部, 再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解。 试剂三 液体 16mL×1 4℃保存 试剂四 粉剂×4 4℃保存 临用前甩几下,使粉剂落到底部, 每支加 0.3mL 蒸馏水充分溶解。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板天平、低温离心机、可调式移液器、恒温培养箱、研钵。 四、肌酸激酶(CK)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆,转移至 EP 管中,12000rpm, 4离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min,设定温度至 37℃,调节波长至 340nm② 所有试剂可预先在 37℃条件下预温 5min,在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 20 试剂一 10 试剂二 10 试剂三 150本试剂盒仅供科研使用 2 【注】1.A 测定大于 1.5,则可减少反应时间 T(如减至 10min)再读取 A2,或减少样本加样量 V1 (如减至 5μL, 则试剂三相应增加),则改变后的 T V1 需代入计算公式重新计算。 2.若△A 的值小于 0.01,则可增大样本体积 V1(如增至 80μL 或更多,则试剂三相应减少),或 延长反应时间 T(如增至 30min 或更长),则改变后的 T V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按组织蛋白含量计算: 定义:37℃条件下,每毫克蛋白质在每分钟内催化产生 1nmoL NADPH 为一个酶活单位。 CK 活性(nmoL/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=214.4×ΔA÷Cpr 2、按组织样本质量计算: 定义:37℃条件下,每克样品在每分钟内催化产生 1nmoLNADPH 为一个酶活单位。 CK 活性(nmoL/min/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1÷V×W)÷T=214.4×ΔA÷W 3、按细胞数量计算: 定义:37℃条件下,每 104个细胞每分钟内催化产生 1nmoLNADPH 为一个酶活单位。 CK 活性(nmoL/min/104 cell)=[(ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.43×ΔA 4、按液体体积计算: 定义:37℃条件下,每毫升液体在每分钟内催化产生 1nmoLNADPH 为一个酶活单位。 CK 活性(nmoL/min/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T=214.4×ΔA V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.02mLV2---反应体系总体积,2×10-4 Ld---96 孔板光径,0.5cmε---NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L/moL/cmW---样本质量,gT---反应时间,15minCpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。 37℃条件下孵育 20min试剂四 10 混匀,37℃条件下,立即于 340nm 处读取 A115min 后读取 A2,△A= A2-A1

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
上海宇淳生物科技有限公司

上海宇淳生物科技有限公司

地址:上海市南航公路1981弄72号

版权所有:上海宇淳生物科技有限公司  备案号:  总访问量:185987  站点地图  技术支持:环保在线  管理登陆