土壤脂肪酶(S-LPS)试剂盒,微板法

土壤脂肪酶(S-LPS)试剂盒,微板法

土壤脂肪酶(S-LPS)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤脂肪酶（S-LPS）活性试剂盒说明书 （货号：WS8330W 微板法 96 样） 一、产品简介： 脂肪酶(EC 3.1.1.3)是一种特殊的酯键水解酶，能催化天然油脂水解,，在食品、医药、洗 涤剂和皮革等许多工业领域中都有广泛的应用。 本试剂盒提供一种简单、快速的检测方法，以对硝基*酚酯作为底物，脂肪酶水解底物 产生具有颜色的对硝基*酚，在405nm波长下测定其吸光值，即可得出脂肪酶活力。 二、试剂盒的组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 A 液：μL×4 支 B 液：5mL×1 瓶 -20℃保存 临用前甩几下，使微量 A 液体落到底 部，再向每支 A 液中加入 1.2mLB 液， 混匀备用，用不完的试剂仍-20℃保存。 试剂二 液体 35mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该标曲。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、低温离心机、可调式移液枪、冰和蒸馏水。 四、土壤脂肪酶（S-LPS）活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 取新鲜土样或风干（可 37 度烘箱风干）土样，先粗研磨，过 40 目筛网备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 405 nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 空白管（仅做一次） 土壤样本（g） 0.1g 试剂一 40 40 试剂二 340 340 混匀，30℃条件振荡反应 20min，立即于 4℃，12000rpm 离心 10min，取出 200μL 上清液至 96 孔板中，于 405nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定-A 空白。 【注】若ΔA 值在零附近，可以延长反应时间 T（如至 40min 或更长），或增加土壤样本量 W（如 增至 0.2g）,则改变后的反应时间 T 和土壤样本质量 W 需代入公式重新计算。 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 0.022x - 0.0066，x 是标准品摩尔质量（nmol），y 是ΔA。本试剂盒仅供科研使用 2 2、酶活定义：每小时每克土样释放出 1nmol 对硝基*酚的酶量定义为一个酶活力单位。 S-LPS(nmol/h/g 干土) =[(△A+0.0066)÷0.022]÷W÷T=136.4×(△A+0.0066) ÷W T---反应时间，20 min=1/3h； W---土壤样本实际取样量，g。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（20μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.8, 1.6, 2.4, 3.2, 4μmol/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 在 96 孔板中加入：10μL 标准品+40μL 的 B 液+330μL 试剂二，混匀，于 405nm 下 读取吸光值，根据结果制作标准曲线。