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土壤植酸酶(S-Phytase)试剂盒

更新时间:2024-05-31

简要描述:

土壤植酸酶(S-Phytase)试剂盒
植酸酶(phytase,EC.3.1.3.8)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶 的总称

土壤植酸酶(S-Phytase)试剂盒

土壤植酸酶(S-Phytase)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤植酸酶(phytase)试剂盒说明书 (货号:WS7330F 分光法 24 样) 一、产品简介: 植酸酶(phytaseEC.3.1.3.8)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶 的总称,属磷酸单酯水解酶,能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效 磷,降低粪便中的磷含量,减轻对环境的污染,改善营养成分的吸收和利用,因此具有极 其广泛的研究和应用价值。 土壤植酸酶在一定温度和 pH 值条件下,水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物,无 机磷在酸性环境中与钼酸铵反应生成蓝色复合物,通过在 700nm 处检测该有色物质的生 成速率即可计算植酸酶活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格试剂名称 保存要求 备注 试剂一 液体 60mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使试剂落入底部,再 加入 30mL 试剂一,充分溶解备 用, 试剂三 液体 20mL×1 4℃保存 试剂四 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使试剂落入底部,再 加入 24mL 蒸馏水,充分溶解备 用。 试剂五 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使试剂落入底部,再 加入 6mL 蒸馏水,充分溶解备用。 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 反应 mix 的制备(现配现用):试剂四:五按照 4:1 的比例混合,可根据样本数量配制需要量, 若一次性用完,可把试剂五一次性全部倒入试剂四中,混合备用。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、天平、低温离心机、恒温水浴锅,可 调式移液器。 四、土壤植酸酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样本情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样风干或者 30℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 700nm,蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土壤 0.2g 0.2g 试剂一 1000 试剂二 1000本试剂盒仅供科研使用 2 混匀,37℃振荡培养 1 小时 试剂三 200 200 混匀,室温条件下 10000rpm,离心 5min。上清液待测。 ③ 显色反应,在 EP 管中依次加入: 上清液 300 300 试剂三 150 150 反应 mix 450 450 混匀,室温(25℃)静置 15min,全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中,于 700nm 处读取吸光值 AA=A 测定 -A 对照(每个测定管需设一个对照管)。 【注】1. 显色反应阶段静置后出现浑浊现象,静置结束后可先于室温 10000rpm,离心 5min 后, 再取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿中。 2. A 值在零附近徘徊,可在 37孵育阶段延长反应时间 T(如增至 3h 或更长),或增加 土壤样本量 W(如增至 0.3g),则改变后的反应时间 T W 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.587x + 0.004x 是标准品摩尔浓度(μmoL/mL, y A2、酶活定义:37℃条件下,pH5.5 的条件下,每克土样每小时释放出 1μmol 的无机磷为 一个酶活力单位。 土壤植酸酶活性(μmol/h/g 土样)=(A-0.004)÷0.587×V1÷W÷T =2.05×(A-0.004)÷W V1---孵育阶段的反应总体积,1.2mLT---反应时间,1hW---样本质量,g附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(5μmoL/mL):标准品用 10mL 试剂一溶解。(母液需在两天内用)。 2 把母液用试剂一稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.6, 1.2, 1.8, 2.4, 3. μmoL/mL。也 可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

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