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查尔酮异构酶(CHI)试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-28

简要描述:

查尔酮异构酶(CHI)试剂盒,微板法
查尔酮异构酶(CHI, EC 5.5.1.6)是个被认识的黄酮类化合物合成相关酶,也是黄酮代谢途径中的关键酶之一。

查尔酮异构酶(CHI)试剂盒,微板法

查尔酮异构酶(CHI)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)试剂盒说明书 WS7001W 微板法 96 样) 一、产品简介: 查尔酮异构酶(CHI, EC 5.5.1.6)是个被认识的黄酮类化合物合成相关酶,也是黄 酮代谢途径中的关键酶之一。广泛存在于多种植物中,在植物的抗菌机制、抗胁迫、细 胞的发育和分化、色素的积累和外源基因的表达等方面起着重要的作用。 查尔酮异构酶(CHI)可使查尔酮形成二氢黄酮,通过检测查尔酮的初始降解速率进而 得出查尔酮异构酶的酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 液体 15mL×1 4℃保存 试剂二 粉体×2 4℃保存 临用前离心或甩几下使试剂落入 底部,每支再分别加 0.7mL 乙醇 充分溶解,4℃保存。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、查尔酮异构酶(CHI)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min,取上 清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,温度设定 30℃,调节波长至 380nm② 试剂放在 30℃水浴 5min③ 按照下表在 96 孔板中依次加入试剂: 试剂名称(μL测定管 样本 40 试剂一 150 试剂二 10 混匀,30℃条件下,立即于 380nm 处读取吸光值 A110min 后读取 A2A=A1-A2【注】:若ΔA 在零附近徘徊,可延长反应时间 T(如:30min 或更长), 或加大样本量 V1(如增至 80μL,则试剂一相应减少),重新 调整后的反应时间 T V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟吸光值变化 0.01 为一个酶活单位(U)。本试剂盒仅供科研使用 2 CHIU/min/mg prot)=(ΔA÷0.01)÷(V1×Cpr) ÷T=250×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 酶活单位定义:每克样本每分钟吸光值变化 0.01 为一个酶活单位(U)。 CHIU/min/g 鲜重)=(ΔA÷0.01)÷(W×V1÷V) ÷T=250×ΔA÷W V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.04 mLT---反应时间,10 minW---样本质量,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒;

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