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二氢黄酮醇还原酶(DFR)试剂盒

更新时间:2024-05-28

简要描述:

二氢黄酮醇还原酶(DFR)试剂盒
二氢黄酮醇还原酶(DFR,EC 1.1.1.219)是花色苷合成代谢中的一个关键酶,负责将 3种二氢黄酮醇还原成无色花色素。

二氢黄酮醇还原酶(DFR)试剂盒

二氢黄酮醇还原酶(DFR)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 二氢黄酮醇还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)试剂盒说明书 WS8001F 分光法 24 样) 一、产品简介: 二氢黄酮醇还原酶(DFREC 1.1.1.219)是花色苷合成代谢中的一个关键酶,负责将 3 种二氢黄酮醇还原成无色花色素。在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽 及其营养品质方面起着重要作用。 二氢黄酮醇还原酶(DFR)作用于二氢槲皮素产生儿茶素,可与香*醛缩合形成红色化 合物,在 500nm 处有特征吸收峰进而得出 DFR 的酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 液体 25mL×1 4℃保存 试剂二 粉体×1 4℃保存 临用前离心或甩几下使试剂落入底部, 再加 1.5mL 乙醇充分溶解,4℃保存。 试剂三 粉体×1 -20℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,分 别加 1.5mL 蒸馏水溶解备用。用不完的 试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融, 三天内用完。 试剂四 粉体×1 4℃保存 临用前离心或甩几下使试剂落入底部, 再加 36mL 盐酸充分溶解,4℃保存。 标准品 粉体×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液器、研钵、 乙酸乙酯无水乙醇、冰。 四、二氢黄酮醇还原酶(DFR)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min,取上 清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min 以上,温度设定 25℃,调节波长至 500nm② 试剂放在 40℃水浴 5min③ 按照下表在 EP 管中依次加入试剂: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 100 100 试剂一 325 375 试剂二 50 试剂三 25 25本试剂盒仅供科研使用 2 混匀,40℃反应 30min 乙酸乙酯 500 500 37℃震荡 10min,取上层溶液,N2 吹干 无水乙醇 250 250 充分震荡混匀,待检液按照下表操作 ④ 在 EP 管中直接加入以下试剂: 试剂名称(μL测定管 对照管 待检液 200 200 试剂四 600 600 混匀,25℃静置 3min,立即于 500nm 处读取吸光 A10min 内读值完成)。△A=A 测定管-A 对照 管(每个样本做一个自身对照)。 【注】:若ΔA 在零附近徘徊,可延长反应时间 T(如:50min 或更长), 或加大样本量 V1(如增至 150μL,试剂一相应减少),重新 调整后的反应时间 T V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程为:y=0.0263x-0.0028x 是标准品浓度(μg/mL),y A2、按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克蛋白每小时分解二氢槲皮素产生1μg儿茶素所需酶量为一酶活单位(U)。 DFRμg/h/mg prot)=[(ΔA+0.0028)÷0.0263×V 乙醇]÷(V1×Cpr) ÷T =190.1×(ΔA+0.0028)÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 酶活定义:每克样本每小时分解二氢槲皮素产生 1μg 儿茶素所需酶量为一酶活单位(U)。 DFRμg/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0028)÷0.0263×V 乙醇]÷(W×V1÷V) ÷T =190.1×(ΔA+0.0028)÷W V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.1mLT---反应时间,30 min=0.5hV 乙醇---0.25mLW---样本质量,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒; 附:标准曲线制作过程: 1 标准品母液(1mg/mL):临用前加 1mL 无水乙醇溶解(1mg/mL)。 2 用无水乙醇把标准品稀释成以下浓度:0816243240. μg/mL。也可根据实 际来调整标准品浓度。 3 按照第④步骤测定管的加样表操作,依据结果即可制作标准曲线。

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