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查尔酮异构酶(CHI)试剂盒

更新时间:2024-05-27

简要描述:

查尔酮异构酶(CHI)试剂盒
查尔酮异构酶(CHI, EC 5.5.1.6)是第一个被认识的黄酮类化合物合成相关酶,也是黄酮代谢途径中的关键酶之一。

查尔酮异构酶(CHI)试剂盒

查尔酮异构酶(CHI)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)试剂盒说明书 WS7001F 分光法 48 样) 一、产品简介: 查尔酮异构酶(CHI, EC 5.5.1.6)是第一个被认识的黄酮类化合物合成相关酶,也是黄 酮代谢途径中的关键酶之一。广泛存在于多种植物中,在植物的抗菌机制、抗胁迫、细 胞的发育和分化、色素的积累和外源基因的表达等方面起着重要的作用。 查尔酮异构酶(CHI)可使查尔酮形成二氢黄酮,通过检测查尔酮的初始降解速率进而 得出查尔酮异构酶的酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 液体 30mL×1 4℃保存 试剂二 粉体×2 4℃保存 临用前离心或甩几下使试剂落 入底部,每支再分别加 1.2mL 乙醇充分溶解,4℃保存。 三、所需的仪器和用品: 紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液器、研钵、 冰和蒸馏水。 四、查尔酮异构酶(CHI)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min,取上 清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取 2、上机检测: ① 紫外分光光度计预热 30min 以上,温度设定 30℃,调节波长至 380nm,蒸馏水调零。 ② 试剂放在 30℃水浴 5min③ 按照下表在 1mL 石英比色皿(光径 1cm)中依次加入试剂: 试剂名称(μL测定管 样本 160 试剂一 600 试剂二 40 混匀,30℃条件下,立即于 380nm 读取吸光值 A110min 后读取 A2【注】:若ΔA 在零附近徘徊,可延长反应时间 T(如:30min 或更长), 或加大样本量 V1(如增至 240μL,则试剂一相应减少),重新 调整后的反应时间 T V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟吸光值变化 0.005 为一个酶活单位(U)。本试剂盒仅供科研使用 2 CHIU/min/mg prot)=(ΔA÷0.005)÷(V1×Cpr) ÷T=125×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 酶活单位定义:每克样本每分钟吸光值变化 0.01 为一个酶活单位(U)。 CHIU/min/g 鲜重)=(ΔA÷0.005)÷(W×V1÷V) ÷T=125×ΔA÷W V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.16 mLT---反应时间,10 minW---样本质量,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒;

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