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花青素还原酶(ANR)试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-27

简要描述:

花青素还原酶(ANR)试剂盒,微板法
花青素还原酶(ANR)参与调控花青素的含量水平以及原花青素的形成,是原花青素单体生物合成过程中关键酶之一,在花青素积累过程中具有重要的调节作用。

花青素还原酶(ANR)试剂盒,微板法

花青素还原酶(ANR)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 花青素还原酶(anthocyanidin reductaseANR)试剂盒说明书 (货号:WS6001W 微板法 96 样) 一、产品简介: 花青素还原酶(ANR)参与调控花青素的含量水平以及原花青素的形成,是原花青素 单体生物合成过程中关键酶之一,在花青素积累过程中具有重要的调节作用。 花青素还原酶(ANR)在NADPH存在下使飞燕草色素转变为表没食子儿茶素和NADP+通过检测反应体系在 340nm 处的吸光值下降速率即可得出花青素还原酶(ANR)活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 110mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 -20℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,再 1.2mL 蒸馏水溶解备用。 试剂二 粉剂 mg×2 -20℃保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,每 支分别加 0.6mL 蒸馏水溶解备用。用不 完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复 冻融,三天内用完。 试剂三 液体 30mL×1 4℃保存 试剂四 粉剂μg×1 -20℃避光 保存 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,再 1.1mL 乙醇溶解备用,用不完的试剂 分装后-20℃避光保存,禁止反复冻融。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、无水乙醇、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰。 四、花青素还原酶(ANR)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织样本,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆,12000rpm4℃离心 10min取上清置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 液体样本:若液体澄清可直接检测;若浑浊则 12000rpm4℃离心 10min,取上 清置冰上待测。 2、上机检测1 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm2 所有试剂解冻至室温(25℃)。 3 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 20 试剂一 10 试剂二 10 试剂三 150 340nm,室温(25℃)孵育 5min本试剂盒仅供科研使用 2 试剂四 10 充分混匀,立即于 340nm 处读取吸光值 A1,后于 40℃温育 20min 后,再读取吸光值 A2,△A=A1-A2【注】1. ΔA 的值在零附近徘徊,可增加样本加样量 V1(如增至 40μL,则试剂三减少至 130μL), 则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算。 2. 若起始值 A1 太大如超过 2(如颜色较深的组织样本,一般色素较高,则起始值相对会偏高), 可以适当减少样本加样量 V1(如减至 10μL),则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算。 3. ΔA 的值大于 0.2,则需减少反应时间(如 40℃温育 20min 减少至 10min),则改变后的反 应时间 T 需代入计算公式重新计算五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算 酶活定义:40℃条件下,每毫克组织蛋白每分钟氧化 1nmolNADPH 定义为一个酶活单位。 ANR 活性(nmol/min/mg prot=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(V1×Cpr) ÷T =160.8×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算 酶活定义:40℃条件下,每克组织每分钟氧化 1nmolNADPH 定义为一个酶活单位。 ANR 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(W×V1÷V) ÷T =160.8×ΔA÷W 3、按液体体积计算 酶活定义:40℃条件下,每毫升液体每分钟氧化 1nmolNADPH 定义为一个酶活单位。 ANR 活性(nmol/min/mL=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷V1÷T =160.8×ΔA V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.02mLV2---反应体系总体积,2×10-4 Ld---96 孔板光径,0.5cmε---NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cmW---样本质量,gT---反应时间,20minCpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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