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αL阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Af)试剂盒微板法

更新时间:2024-06-19

简要描述:

αL阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Af)试剂盒微板法
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-Afa,EC 3.2.1.55)是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残 基的糖苷酶类,使细胞壁阿拉伯半乳聚糖

αL阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Af)试剂盒微板法

αL阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Af)试剂盒微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase, α-Afa)试剂盒说明书 (货号:WS4170W 微板法 48 样) 一、产品简介: α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-AfaEC 3.2.1.55)是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残 基的糖苷酶类,使细胞壁阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖不断解离,促进果胶 的增溶和降解。由于果实成熟过程中常常伴随着阿拉伯糖的丧失,该酶活性在果实成熟软 化中的研究具有重大意义。 本试剂盒提供一种简单,灵敏,快速的测定方法,α-Afa分解对-硝基苯阿拉伯呋喃糖 苷生成对-硝基*酚,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率即可得出α-Afa 酶活性大小。 二、试剂盒的组成和配制: 三、所需的仪器和用品 酶标仪、96 孔板、低温台式离心机、水浴锅、研钵、冰和蒸馏水。 四、α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-Afa)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本:称取约 0.2g 组织(水分充足的样本取 0.5g),加入 1mL 提取液,冰浴匀 浆,然后 12000rpm4℃,离心 10min,取上清作为粗体液,置于冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: 酶标仪预热 30min 以上,温度设定 37℃,波长设定为 405nm所有试剂解冻至室温(25℃)。 EP 管中依次加入: 【注】:若ΔA 过小,可以延长保温时间(如:40min 或更长),或增加样本加样量 V1(如增至 20μL则提取液相应减少),则改变后的反应时间 T 和加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 粉体 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使试剂粉体落入底部, 再加 1.5mL 蒸馏水充分溶解备用。 试剂二 液体 18mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 10 10 试剂一 25 蒸馏水 25 提取液 35 35 迅速混匀,37℃保温 30min 试剂二 180 180 混匀,取 200μL 96 孔板中,于 405nm 处测定吸光 AΔA=A 测定-A 对照(每个样本需设一个对照管)。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1标准曲线方程为 y = 0.063x - 0.0015x 为标准品摩尔质量(nmol),y ΔA2、按样本蛋白浓度计算: 单位的定义:每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol -硝基*酚定义为一个酶活性单位。 α-Afa 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0015) ÷0.063]÷(V1×Cpr)÷T =52.9×(ΔA+0.0015) ÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 单位的定义:每克组织每分钟产生 1nmol -硝基*酚定义为一个酶活性单位。 α-Afa 活性(nmol/min/g 鲜重)= [(ΔA+0.0015) ÷0.063]÷(W×V1÷V)÷T =52.9×(ΔA+0.0015)÷W V----加入提取液体积,1mLV1----加入反应体系中样本体积,0.01mLW----样本质量,gT----反应时间,30minPNP 对分子质量----139.11 Cpr----样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2mg/mL。也可根据 实际样本来调整标准品浓度。 3 EP 管加入:10μL 标准品+25μL 蒸馏水+35μL 提取液+180μL 试剂二,混匀,取 200μL 96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值。 4 根据结果制作标准曲线。

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