产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > > 生化试剂盒 > 乙酰酯酶(AE)活性检测试剂盒

乙酰酯酶(AE)活性检测试剂盒

更新时间:2024-06-19

简要描述:

乙酰酯酶(AE)活性检测试剂盒
乙酰酯酶(EC 3.1.1.6,AE)已被证明是消除饲料细胞壁中阿魏酸等酚酸类木质素的关 键酶。

乙酰酯酶(AE)活性检测试剂盒

乙酰酯酶(AE)活性检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 乙酰酯酶(AcetylesteraseAE)活性测定试剂盒说明书 (货号:WS8170F 分光法 24 样) 一、产品简介: 乙酰酯酶(EC 3.1.1.6AE)已被证明是消除饲料细胞壁中阿魏酸等酚酸类木质素的关 键酶。可与其他细胞壁降解酶协同作用共同促进饲料等细胞壁的降解。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 液体 30mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂×2 4℃保存 临用前每支加 0.7mL 无水乙醇混 匀溶解,仍 4℃保存。 试剂三 液体 5mL×1 4℃保存 标准品 粉体×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、水浴锅、可调式移液 器、研钵、蒸馏水。 四、乙酰酯酶(AE)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本:取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰 浴匀浆,4×12000rpm 离心 15min,取上清液待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取 ② 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或 细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:可直接测定,或者适当稀释后测定。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测① 可见分光光度计预热 30 min,调节波长为 405nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂于 25℃水浴中预热 10 min③ 在 EP 管中依次加入下列试剂: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 100 100 试剂一 460 500 试剂二 40 混匀,40℃孵育 30min试剂三 100 100 混匀,取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中(若有浑浊可 8000rpm 离心 5min 后取上 清),于 405nm 读取 A 值,ΔA=A 测定-A 对照(每 个样本做一个自身对照)。本试剂盒仅供科研使用 2 【注】:ΔA 的值非常低在零附近,可增加样本量 V1(如增至 200μL,则试剂一相应减少) 或延长反应时间 T(如增至 60min 或更长),则重新调整的 V1 T 代入公式重新计算。 A 的值超过 1,则需要稀释样本,稀释倍数 D 代入计算公式; 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 0.0259x - 0.0031x PNP 摩尔质量(nmol);y 是△A2按照样本质量计算: 酶活定义:每克组织每分钟水解底物产生 1nmol PNP 定义为一个酶活单位。 AE (nmol/min/g 鲜重)=[(A+0.0031)÷0.0259]÷(W×V1÷V)÷T×D=12.9×(A+0.0031)÷W×D 3按照样本蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克蛋白每分钟水解底物产生 1nmol PNP 定义为一个酶活单位。 AE (nmol/min/mg prot)=[(A+0.0031)÷0.0259]÷(Cpr×V1)÷T×D =12.9×(A+0.0031)÷Cpr×D 4、按细菌/细胞数量计算: 酶活定义:每 104个细胞每分钟水解底物产生 1nmol PNP 定义为一个酶活单位。 AE (nmol/min/104 cell)=[(A+0.0031)÷0.0259]÷(500×V1÷V)÷T×D =0.03×(ΔA+0.0031)×D 5、按液体体积计算: 酶活定义:每毫升液体每分钟水解底物产生 1nmol PNP 定义为一个酶活单位。 AE(nmol/min/mL)=[(A+0.0031)÷0.0259]÷V1÷T=12.9×(A+0.0031) W---样品质量,gV---提取液体积,1 mLV1---上清液体积(mL),0.1mLT---反应时间,30 minD---稀释倍数,未稀释即为 1500---细胞数量,万; Cpr---上清液蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(10μmol/mL):向标准品 EP 管里面加入 1.4ml 蒸馏水超声溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2 μmol/ml。也可根 据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据对照管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
上海宇淳生物科技有限公司

上海宇淳生物科技有限公司

地址:上海市南航公路1981弄72号

版权所有:上海宇淳生物科技有限公司  备案号:  总访问量:185987  站点地图  技术支持:环保在线  管理登陆