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果胶裂解酶(PL)试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-19

简要描述:

果胶裂解酶(PL)试剂盒,微板法
果胶裂解酶(反式消去酶,EC 4.2.2.10)是通过反式消去作用裂解果胶聚合体的一种果 胶酶,主要来源于微生物,可提高水果出汁率,并在减少环境污染等方面具有潜在的应 用价值。

果胶裂解酶(PL)试剂盒,微板法

果胶裂解酶(PL)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 果胶裂解酶(pectinate lyasesPL)试剂盒说明书 (货号:WS2070W 微板法 96 样) 一、产品简介: 果胶裂解酶(反式消去酶,EC 4.2.2.10)是通过反式消去作用裂解果胶聚合体的一种果 胶酶,主要来源于微生物,可提高水果出汁率,并在减少环境污染等方面具有潜在的应 用价值。 果胶裂解酶(PL)作用于果胶中的α-1,4 糖苷键,生成在还原端 C4 C5 之间位置具 有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在 235nm 处有特征吸收峰。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 提取液 液体 120mL×1 4℃保存 试剂一 液体 12mL×1 4℃保存 试剂二 液体 12mL×1 4℃保存 试剂三 液体 12mL×1 4℃保存 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板(UV 板)、天平、低温离心机、恒温水浴锅、研钵。 四、果胶裂解酶的测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.2g),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 细菌/培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细 胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间 10s,重复 30 次);12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 5001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接测定。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min,调节波长至 235nm② 试剂一和试剂二预先在 50℃水浴 5min③ 在 EP 管中按照下表依次加入试剂: 试剂名称(μL测定管 对照管 试剂一 120 试剂二 120 上清液 20 20 混匀,50℃反应 30min 试剂三 60 60 混匀,取 150μL 96 孔板(UV 板)测 235nm 处吸光值 AA=A 测定管-A本试剂盒仅供科研使用 2 对照管(每个样本做一个自身对照)。 【注】1. A 测定管大于 2,可减少上清液取样量 V1(如减至 10μL 则用 10μL 的蒸馏水补齐), 则改变后的 V1 需代入公式重新计算。 2. A 在零附近徘徊,可适当增加上清液取样量 V1(如增至 40μL 则试剂三相应减少), 或延长反应时间 T(如由 30min 延长至 60min),则改变后的 V1 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、按照蛋白浓度计算: 酶活性定义:在 50℃,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的 酶量为一个酶活力单位。 果胶裂解酶(PL)活性(nmol/min/mg prot)=A÷(ε×d)×109×V2÷(V1×Cpr)÷T =193.2×A÷Cpr 2、按照样本质量计算: 酶活性定义:在 50℃,每克组织每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶 量为一个酶活力单位。 果胶裂解酶(PL)活性(nmol/min/g 鲜重)=A÷(ε×d)×109×V2÷(V1÷V×W)÷T =193.2×A÷W 3、按细菌/细胞密度计算: 单位定义:在 50℃,每 1 万个细菌或细胞每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸 所需的酶量为一个酶活力单位。 果胶裂解酶(PL)活性(nmol/min/104 cell)=A÷(ε×d)×109×V2÷(V1÷V×500)÷T =0.39×A 4、按液体体积计算: 酶活性定义:在 50℃,每毫升液体每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的 酶量为一个酶活力单位。 果胶裂解酶(PL)活性(nmol/min/mL)=A÷(ε×d)×109×V2÷V1÷T=193.2×A ε---不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:4600L/mol/cmd---比色皿光径,0.375cmV2---反应总体积,2×10-4LV1---反应体系中上清液体积,0.02mLV---加入提取液体积,1mLW---样本质量,gT---反应时间,30min500---细菌或细胞总数,500 万; Cpr----样本蛋白浓度,mg/mL,建议使用本公式的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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