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果胶甲酯酶(PE)试剂盒

更新时间:2024-06-19

简要描述:

果胶甲酯酶(PE)试剂盒
果胶酯酶,属果胶酶系,亦称果胶甲酯酶、果胶氧化酶。催化水解果胶长链上的甲氧酯水解产生小分子 物质果胶酸和甲醇, 从而增加果胶在水中的溶解度。

果胶甲酯酶(PE)试剂盒

果胶甲酯酶(PE)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 果胶酯酶(pectinesterasePE)试剂盒说明书 (货号:WS7070D 48样) 一、产品简介: 果胶酯酶,属果胶酶系,亦称果胶甲酯酶、果胶氧化酶。催化水解果胶长链上的甲氧酯水解产生小分子 物质果胶酸和甲醇, 从而增加果胶在水中的溶解度。广泛存在于高等植物和可以降解细胞壁的细菌和真菌 中,起内源调控植物细胞壁上及细胞之间果胶含量的作用。 果胶酯酶(PE)催化水解果胶分子释放H+,使反应体系的pH下降,用碱液维持体系的pH始终保持在7.8(*酞指示剂维持在粉红色),通过碱消耗的NaOH 量反映果胶酯酶的活性。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 80mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前加 12.5mL 蒸馏水于试剂瓶(50加热溶 解),冷却后转入 250mL 容量瓶,并定容至 250mL试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部,再加 1.5mL 乙醇溶 解备用。 试剂三 液体 15mL×1 4℃保存 试剂四 液体 25mL×1 4℃保存 三、所需仪器和用品: 天平、研钵、离心机、水浴锅或恒温培养箱。 四、果胶酯酶(PE)的测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本:取 0.5g 组织样品(叶片类样本可取 0.15g),加 1.5mL 提取液冰浴研磨, 12000rpm4℃离心 15min,取全部上清液待测。 【注】:若酶活力太高,可降低样本取样质量W或将上清液稀释2-5倍后再进行测定,并在计算公式 中乘以稀释倍数D② 细菌/培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或 细胞加入 1.5mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 5001 的比例进行提取。 2、上机检测: ① 试剂一于37℃烘箱保温10min② 取出1mL的上清液转移至离心管或试管中。 ③ 向离心管或试管中依次加25μL 试剂二,4mL试剂一,混匀,并用试剂三调pH7.8(粉 红色)。 ④ 将离心管或试管于37℃(水浴锅或恒温培养箱)孵育60min。每隔20分钟用试剂四调 pH,使其维持在7.8(粉红色)。同时记录所消耗的试剂四的体积V2mL)。 五、结果计算: 1、按照样本质量计算: 酶活定义:每克组织每小时消耗1μmol NaOH 定义为一个酶活单位UPE 活性(μmoL/min/g)=20×V2÷(V1÷V×W) ÷T×D =30×V2÷W×D 2、按照蛋白浓度计算:本试剂盒仅供科研使用 2 酶活定义:每毫克蛋白每小时消耗1μmol NaOH 定义为一个酶活单位UPE 活性(μmoL/min/mg prot)=20×V2÷(V1÷V×Cpr)÷T×D =30×V2÷Cpr×D 3、按细菌/细胞密度计算: 酶活定义:每 1 万个细菌或细胞每小时消耗 1μmol NaOH 定义为一个酶活单位 UPE 活性(μmoL/min/104 cell)=20×V2÷(V1÷V×500)÷T×D =0.06×V2×D V1---加入离心管或试管中的上清液体积,1mLV---提取液体积,1.5mLV2---滴定所消耗的试剂四的量,mLT---反应时间,60 min=1hD---样品稀释倍数; W---样品质量,g20---试剂四的NaOH 浓度,20μmol/mL500---细菌或细胞总数,500 万; Cpr----上清液蛋白质浓度(mg/mL),建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

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