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多聚半乳糖醛酸酶(PG)/果胶酶试剂盒

更新时间:2024-06-18

简要描述:

多聚半乳糖醛酸酶(PG)/果胶酶试剂盒
果胶酶是指分解果胶的多种酶,主要包括多聚半乳糖醛酸酶(PG),果胶裂解酶(PL), 果胶甲酯酶(PME)和原果胶酶,贮藏过程中起作用的主要是 PG。

本试剂盒仅供科研使用 1 多聚半乳糖醛酸酶(ploygalacturonasePG)试剂盒说明书 (货号:WS1070F 分光法 48 样) 一、产品简介: 果胶酶是指分解果胶的多种酶,主要包括多聚半乳糖醛酸酶(PG),果胶裂解酶(PL)果胶甲酯酶(PME)和原果胶酶,贮藏过程中起作用的主要是 PG。所以该酶在食品贮藏 保鲜和植物抗病性等领域具有较高的研究价值。 果胶在多聚半乳糖醛酸酶(PG)作用下,能水解产生带有具有还原性醛基的半乳糖醛 酸。与 DNS 试剂反应生成红棕色物质,在 540nm 有特征吸收峰,测定 540nm 处吸光 值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 液体 20mL×1 4℃保存 试剂二 液体 20mL×1 4℃保存 试剂三 液体 46mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需仪器和用品: 可见分光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、天平、可调式移液器、 水浴锅、研钵、冰。 四、多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.2g 组织(水分充足的样本可取 1g),加入 1mL 经预冷的 95%乙醇冰浴匀 浆,4℃放置 10min12000rpm4℃离心 5min;弃上清,留沉淀,向沉淀中加入经预 冷的 80%乙醇混匀,4℃放置 10min12000rpm4℃离心 5min;弃上清,留沉淀。再 向沉淀中加入 1mL 经预冷提取液,涡旋混匀,4℃放置 10min12000rpm4℃离心 10min;留上清,弃沉淀。上清液置冰上待测。 ② 细菌/培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或 细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s间隔 10s,重复 30 次);12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 5001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测① 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 60 60 试剂一 390 试剂二 390 40℃水浴 30min 试剂三 450 450本试剂盒仅供科研使用 2 【注】若△A 在零附近徘徊,可增加样本上样量 V1(如增加至 100μL,则试剂一或二相应 减少),或延长反应时间 T(如增至 1h),则改变后的 V1 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 11.547x - 0.0054x 为标准品质量,mgy 为△A2、按照蛋白浓度计算: 酶活定义:在 40℃,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。 PG 活性(mg/h/mg prot)=[(ΔA+0.0054)÷11.547]÷(V1×Cpr)÷T=2.89×(ΔA+0.0054)÷Cpr 3、按照样本质量计算: 酶活定义:在 40℃,每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。 PG 活性(mg/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0054)÷11.547]÷(V1÷V×W)÷T=2.89×(ΔA+0.0054)÷W 4、按细菌/细胞密度计算: 酶活定义:在 40℃,每 1 万个细菌或细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶 活力单位。 PG 活性(mg/h/104 cell)=[(ΔA+0.0054)÷11.547]÷(V1÷V×W)÷T=0.006×(ΔA+0.0054) 5、按液体体积计算: 酶活定义:在 40℃,每毫升液体每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位 PG 活性(mg/h/mL)=[(ΔA+0.0054)÷11.547]÷V1÷T=2.89×(ΔA+0.0054) V---加入提取液体积,1mLV1---反应中样本体积,0.06mLW---样本质量,gT---反应时间,0.5h500---细菌或细胞总数,500 万; Cpr---样本蛋白浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(10mg /mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 的蒸馏水(母液需在 两天内用且-20℃保存)。 2 把母液稀释成五个浓度梯度的标准品:00.50.60.70.81 mg/mL。也可根据 实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。 沸水浴95-100℃)5min,冰浴或淋浴冷却后,全部转移于 1mL 玻璃比色皿中,540nm 处测定吸光值 A,△A=A 测定 -A 对照管(每个测定管设一个对照管)。多聚半乳糖醛酸酶(PG)/果胶酶试剂盒

多聚半乳糖醛酸酶(PG)/果胶酶试剂盒


本试剂盒仅供科研使用
1
多聚半乳糖醛酸酶(ploygalacturonasePG)试剂盒说明书
(货号:WS1070F 分光法 48 样)
一、产品简介:
果胶酶是指分解果胶的多种酶,主要包括多聚半乳糖醛酸酶(PG),果胶裂解酶(PL)
果胶甲酯酶(PME)和原果胶酶,贮藏过程中起作用的主要是 PG。所以该酶在食品贮藏
保鲜和植物抗病性等领域具有较高的研究价值。
果胶在多聚半乳糖醛酸酶(PG)作用下,能水解产生带有具有还原性醛基的半乳糖醛
酸。与 DNS 试剂反应生成红棕色物质,在 540nm 有特征吸收峰,测定 540nm 处吸光
值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
二、试剂盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1
4℃保存
试剂一
液体 20mL×1
4℃保存
试剂二
液体 20mL×1
4℃保存
试剂三
液体 46mL×1
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需仪器和用品:
可见分光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、天平、可调式移液器、
水浴锅、研钵、冰。
四、多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.2g 组织(水分充足的样本可取 1g),加入 1mL 经预冷的 95%乙醇冰浴匀
浆,4℃放置 10min12000rpm4℃离心 5min;弃上清,留沉淀,向沉淀中加入经预
冷的 80%乙醇混匀,4℃放置 10min12000rpm4℃离心 5min;弃上清,留沉淀。再
向沉淀中加入 1mL 经预冷提取液,涡旋混匀,4℃放置 10min12000rpm4℃离心
10min;留上清,弃沉淀。上清液置冰上待测。
② 细菌/培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或
细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s
间隔 10s,重复 30 次);12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 5001 的比例进行提取。
③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测
① 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入:
试剂名称(μL
测定管
对照管
样本
60
60
试剂一
390
试剂二
390
40℃水浴 30min
试剂三
450
450本试剂盒仅供科研使用
2
【注】若△A 在零附近徘徊,可增加样本上样量 V1(如增加至 100μL,则试剂一或二相应
减少),或延长反应时间 T(如增至 1h),则改变后的 V1 T 需代入公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线:y = 11.547x - 0.0054x 为标准品质量,mgy 为△A
2、按照蛋白浓度计算:
酶活定义:在 40℃,每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG 活性(mg/h/mg prot)=[(ΔA+0.0054)÷11.547]÷(V1×Cpr)÷T=2.89×(ΔA+0.0054)÷Cpr
3、按照样本质量计算:
酶活定义:在 40℃,每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
PG 活性(mg/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0054)÷11.547]÷(V1÷V×W)÷T=2.89×(ΔA+0.0054)÷W
4、按细菌/细胞密度计算:
酶活定义:在 40℃,每 1 万个细菌或细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶
活力单位。
PG 活性(mg/h/104 cell)=[(ΔA+0.0054)÷11.547]÷(V1÷V×W)÷T=0.006×(ΔA+0.0054)
5、按液体体积计算:
酶活定义:在 40℃,每毫升液体每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为一个酶活力单位
PG 活性(mg/h/mL)=[(ΔA+0.0054)÷11.547]÷V1÷T=2.89×(ΔA+0.0054)
V---加入提取液体积,1mL
V1---反应中样本体积,0.06mL
W---样本质量,g
T---反应时间,0.5h
500---细菌或细胞总数,500 万;
Cpr---样本蛋白浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(10mg /mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 的蒸馏水(母液需在
两天内用且-20℃保存)。
2 把母液稀释成五个浓度梯度的标准品:00.50.60.70.81 mg/mL。也可根据
实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。
沸水浴95-100℃)5min,冰浴或淋浴冷却后,全部转移于
1mL 玻璃比色皿中,540nm 处测定吸光值 A,△A=A 测定
-A 对照管(每个测定管设一个对照管)。

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