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焦磷酸:果糖6磷酸1磷酸转移酶试剂盒微板法

更新时间:2024-06-17

简要描述:

焦磷酸:果糖6磷酸1磷酸转移酶试剂盒微板法
焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP,EC2.7.1.90)是一种胞质酶,广泛存在于 植物组织中,催化果糖-6-磷酸与果糖-1,6-二磷酸之间的可逆转化,在光合作用碳代谢 中起重要作用。

焦磷酸:果糖6磷酸1磷酸转移酶试剂盒微板法

焦磷酸:果糖6磷酸1磷酸转移酶试剂盒微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(Pyrophosphate: fructose-6 – phosphate-1-phosphoric acid transferasePFP)试剂盒说明书 (货号:WS7060W 微板法 96 样) 一、产品简介: 焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFPEC2.7.1.90)是一种胞质酶,广泛存在于 植物组织中,催化果糖-6-磷酸与果糖-1,6-二磷酸之间的可逆转化,在光合作用碳代谢 中起重要作用。 PFP 催化 6-磷酸果糖转化为 1,6-二磷酸果糖,接着在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作 用下转变为磷酸二羟丙酮,再由 3-磷酸甘油脱氢酶催化,并使 NADH 340nm 处的吸 光度下降,由此反映 PFP 酶活性高低。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 120mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×2 -20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,每 支再加 3.1mL 的蒸馏水溶解,用 不完的试剂分装后-20℃保存,禁 止反复冻融,三天内用完。 试剂二 液体μL×1 -20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,再 6.1mL 的蒸馏水溶解 试剂三 液体 2.2mL×1 4℃保存 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、低温离心机、可调式移液器、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。 四、焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP)酶活测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm4℃离心 20min取上清置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 340nm② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 依次在 96 孔板中加入: 试剂名称(μL测定管 样本 20 提取液 60 试剂一 60 试剂二 60 试剂三 20 混匀,室温(25℃)条件下,10s 时于 340nm 处读取吸光值 A120min 后读取 吸光值 A2,△A=A1-A2【注】1.若A 的值在零附近,可以适当延长反应时间到 30min 或更长读取 A2,改变后的反本试剂盒仅供科研使用 2 应时间需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量,则改变后的加样体积 V1 需代 入计算公式重新计算。 2. 若起始值 A1 太大如超过 2(如颜色较深的植物叶片,一般色素较高,则起始值相对 会偏高),可以适当减少样本加样量,则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。 或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 12000rpm, 4℃离心 10min,上清液 用于检测; 3. ΔA 的值大于 0.5,则需减少反应时间(如减少至 5min),则改变后的反应时间 T 需代入计算公式重新计算。 4. 若下降趋势不稳定,可以每隔 10S 读取一次吸光值,选取一段线性下降的时间段来 参与计算,相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按照样本蛋白浓度计算 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PFPnmol/min/mg prot)=[ ΔA÷ε×d×V2×109]÷(Cpr×V1÷V) ÷T=160.77×ΔA÷Cpr 2、按照样本质量计算 酶活定义:每克组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 PFPnmol/min/g 鲜重)=[ ΔA÷ε×d×V2×109]÷(W ×V1÷V) ÷T=160.77×ΔA÷W εNADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光径,0.5cmV:加入提取液体积,1mLV1:加入样本体积,0.02mLV2:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4LT:反应时间,20 minW:样本质量,g Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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