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海藻糖含量试剂盒(蒽酮比色法)微板法

更新时间:2024-06-13

简要描述:

海藻糖含量试剂盒(蒽酮比色法)微板法
海藻糖(trehalose)是一种非还原性双糖,广泛存在于动植物、微生物和培养细胞中。

海藻糖含量试剂盒(蒽酮比色法)微板法

海藻糖含量试剂盒(蒽酮比色法)微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 海藻糖含量试剂盒(蒽酮比色法)说明书 (货号:WS2550W 微板法 96 样) 一、产品简介: 海藻糖(trehalose)是一种非还原性双糖,广泛存在于动植物、微生物和培养细胞中。具有 在干燥、干旱、冷冻、高渗透压等恶劣环境下保护核酸和蛋白质等生物大分子的作用,被 广泛用于医药、保健品、酶、食品等制品的保存。 本试剂盒用蒽酮-硫酸法测定海藻糖含量,利用糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱 水生成糠醛或羟甲基糖醛后,与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色。该物质在 620 nm 处有最大吸收,其颜色的深浅与糖含量成正比。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 120mL×2 4℃保存 试剂一 粉体 mg×3 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,每瓶 11mL 浓硫酸溶解备用。剩余 试剂 4℃保存一周。 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液器、研钵、浓硫酸和蒸馏水。 四、海藻糖含量测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织放入研钵中,加入 1mL 提取液进行研磨成匀浆,室温晃动提取 30min8000rpm 室温(25℃)离心 10min,取上清。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/真菌样本: 先收集细菌或真菌到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或真菌加入 1mL 提取 液;冰浴超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),室温晃动提取 30min8000rpm 室温(25℃)离心 10min,取上清。 【注】:若增加样本量,可按照提取液体积(mL) :细菌或真菌数量(104)1500~1000 的比例提取。 ③ 液体样本: 0.1mL 液体加入 1mL 提取液涡旋混匀,室温晃动提取 30min8000rpm 室温(25℃离心 10min,取上清。 【注】:若增加样本量,可按照液体体积(mL):提取液体积(mL)15~10 的比例提取。 2、上机检测① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 620nm② 调节水浴锅至 95 度。 ③ 先调2-3个样本做预测定,若吸光值A大于1.5,将样本用提取液稀释后(5-20倍)再 测定,计算公式中乘以相应的稀释倍数D④ 在 EP 管中依次加入:本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称(μL测定管 空白管 样本 150 蒸馏水 150 试剂一 300 300 95-100℃沸水浴 3min,冷却后,混匀200μL 96 孔板 中,于 620nm 处读取吸光值 AΔA=A 测定-A 空白。 五、结果计算: 1、标准曲线方程为:y = 0.0636x + 0.0033x 为标准品质量(μg),y 为吸光值 A2、按样本鲜重计算: 海藻糖含量(μg/g 鲜重)=[(ΔA-0.0033)÷0.0636]÷(W×V1÷V)×D=104.8×(ΔA-0.0033)÷W×D 3、按细菌或真菌密度计算: 海藻糖含量(μg/104cell)=[(ΔA-0.0033)÷0.0636]÷(500×V1÷V)×D=0.21×(ΔA-0.0033)×D 4、液体中海藻糖含量计算: 海藻糖含量(μg/mL)=[(ΔA-0.0033)÷0.0636]÷(V2×V1÷V)×D =1048×(ΔA-0.0033)×D V---提取液总体积 1mLV1---反应体系中样本体积,150μL=0.15mLV2---液体体积,0.1mLW---样本质量,gD---稀释倍数,未稀释即为 1500---细菌或真菌总数,500 万。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 2mL 提取液(母液需在两天 内用且-20℃保存)。 2 把母液用提取液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1.mg/mL也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

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