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海藻糖酶(Trehalase)试剂盒

更新时间:2024-06-13

简要描述:

海藻糖酶(Trehalase)试剂盒
海藻糖酶(EC 3.2.1.28)广泛存在于细菌、霉菌和动植物中。能够专一性的水解海藻糖 生成葡萄糖而直接用于能量供应。

海藻糖酶(Trehalase)试剂盒

海藻糖酶(Trehalase)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 海藻糖酶(TrehalaseTHL)试剂盒说明书 (货号:WS4550F 分光法 24 样) 一、产品简介: 海藻糖酶(EC 3.2.1.28)广泛存在于细菌、霉菌和动植物中。能够专一性的水解海藻糖 生成葡萄糖而直接用于能量供应。 海藻糖酶催化海藻糖生成葡萄糖,葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下与特异显色剂反应 生成有色物质,通过检测该有色物质的生成量,即可得出海藻糖酶的活性大小。 二、测试盒组成和配制: 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、低温离心机、可调式移液 器、研钵、冰。 四、海藻糖酶(THL)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g)至研钵中,加入 1mL 提取液,进行冰 浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 细菌/真菌样本: 先收集细菌或真菌到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或真菌加入 1mL 提取液; 冰浴超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 次);4℃×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~10001 比例进行提取。 ③ 液体样本:澄清的液体样本,可直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 510nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 煮沸样本:上清液(样本)在 95-100℃煮沸 5min 即可,然后离心,上清液备用。 ④ 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 100 100(煮沸样本) 试剂一 200 200 试剂二 50 50 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 液体 10mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部, 再加入 3mL 蒸馏水溶解备用。 试剂三 粉剂 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部, 再加入 4.2mL 蒸馏水溶解备用。 试剂四 液体 26mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂本试剂盒仅供科研使用 2 30℃反应 1 小时后,8000rpm 离心 10 分钟,取上清液待测。 ⑤ 显色反应,在 1mL 玻璃比色皿依次加入(或者在 EP 管中依次加入下列试剂,反应 完*后再取全部液体转移至比色皿中测定): 上清液 200 200 试剂三 80 80 试剂四 520 520 40℃反应 20min,于 510nm 处读取吸光值 AA=A 测定-A 对照。 【注】1.若测定管 A 值大于 1.5,可以对样本用蒸馏水进行稀释(尤其是含糖量高的果实类样本), 或者对步的上清液用蒸馏水进行稀释,则稀释倍数 D 代入计算公式计算。 2.A 差值在零附近,可增加步中样本的体积 V1(如增至 200μL,则试剂一相应减少), 则改变后的 V1 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程为 y = 0.0349x + 0.0029x 为标准品质量(μg),y A2、按照蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克组织蛋白在每小时催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 THL(μg/h/mg prot)=[(ΔA-0.0029)÷0.0349×(0.35÷0.2)]÷(V1×Cpr)÷T=501.4×(ΔA-0.0029)÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 酶活定义:每克组织每小时催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 THL(μg/h/g 鲜重)=[(ΔA-0.0029)÷0.0349×(0.35÷0.2)]÷(W×V1÷V)÷T=501.4×(ΔA-0.0029)÷W 4、按细菌或真菌密度计算: 酶活定义:每 1 万个细菌或真菌每小时催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 THL(μg/h/104cell)=[(ΔA-0.0029)÷0.0349×(0.35÷0.2)]÷(500×V1÷V)÷T=(ΔA-0.0029) 5、按液体体积计算: 酶活定义:每毫升液体每小时催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 THL(μg/h/mL)=[(ΔA-0.0029)÷0.0349×(0.35÷0.2)]÷V1÷T=501.4×(ΔA-0.0029) V--提取液体积,1 mLV1--样本体积:0.1mLW--样本质量,gT--反应时间,1 小时; 500--细菌或真菌数量,500 万;0.35--第④歩反应的总体积;0.2--第⑤歩反应上清液体积; Cpr--样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在两天内用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度:0, 0.04,0.08,0.12,0.16, 0.2mg/mL3 于第⑤歩显色反应阶段:200μL 标准品+80μL 试剂三+520μL 试剂四,40℃反应 20min510nm 处读取吸光值 A,依据结果即可制作标准曲线。

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