更新时间:2024-06-13
淀粉分支酶(SBE)试剂盒,微板法淀粉分支酶(SBE,EC 2.4.1.18)是参与支链淀粉合成的关键酶之一,在淀粉生物合 成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。
淀粉分支酶(SBE)试剂盒,微板法
淀粉分支酶(SBE)试剂盒,微板法
本试剂盒仅供科研使用 1 淀粉分支酶(Starch branching enzyme,SBE)试剂盒说明书 (货号:WS9350W 微板法 48 样) 一、产品简介: 淀粉分支酶(SBE,EC 2.4.1.18)是参与支链淀粉合成的关键酶之一,在淀粉生物合 成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。 SBE 可使底物含量减少,从而降低底物与碘显色剂形成的在 660nm 有吸收峰的蓝 色复合物,一定时间内吸光度下降的百分率可以反映 SBE 酶活性的大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 15mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 瓶 4℃保存 临用前甩几下,使试剂落入底部,先加 1mL 蒸馏水混合均匀,再徐徐加入煮沸 (95℃)的蒸馏水 5mL,继续煮沸 2min, 呈透明溶解状态,待冷却后使用。 试剂三 液体 40mL×1 瓶 4℃保存 试剂四 液体 2mL×2 支 4℃保存 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。 四、淀粉分支酶(SBE)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min, 取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 660nm。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL) 测定管 对照管 样本 10 10 (95℃煮沸 10min 的酶液) 试剂一 100 100 试剂二 50 50 37℃孵育 10min,沸水浴 2min,流水冷却至室温。 试剂三 400 400 试剂四 20 20 混匀,显色 10min 后,取出 200μL 至 96 孔板中,于 660nm 处读取 吸光值 A,ΔA=A 对照管-A 测定管(每个测定管需设一个对照管)。 【注】若ΔA 差值较小,可加大样本量。则改变后的加样量 V1 需重新代入公式计算。 五、结果计算: 1、按照蛋白浓度计算: 酶活定义:以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示,每毫克蛋白每降低 1%碘蓝值为本试剂盒仅供科研使用 一个酶活性单位。 SBE 活性(U/mg prot)= ΔA /A 对照管×100%÷(V1×Cpr)=100×ΔA /A 对照管÷Cpr 2、按照样本鲜重计算: 酶活定义:以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示,每克组织每降低 1%碘蓝值为一 个酶活性单位。 SBE 活性(U/g 鲜重)= ΔA /A 对照管×100%÷(W×V1÷V)= 100 ×ΔA /A 对照管÷W V---加入提取液体积,1 mL; V1---加入样本体积,0.01mL; W---样本质量,g; Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 2