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可溶性糖含量(SS)试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-13

简要描述:

可溶性糖含量(SS)试剂盒,微板法
糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

可溶性糖含量(SS)试剂盒,微板法

可溶性糖含量(SS)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 可溶性糖含量试剂盒说明书 (货号:WS1050W 微板法 96 样) 一、产品简介: 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。 糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮 脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色物质,其在可见光区 620nm 波长处有最大吸收, 且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。该方法用于可溶性单糖、寡糖和多糖 的含量测定,具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。 该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类(包括单糖:戊糖、已糖、蔗糖、糖原、多 缩葡萄糖等),所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉剂×2 4℃避光保存 试剂二 液体 5mL×1 4℃保存 标准品 粉剂×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 工作液配制:吸取 2mL 试剂二加入到一支试剂一中,混匀并充分溶解,即得工作液。 (如难溶解,可超声溶解或者 60℃水浴溶解;剩余试剂 4℃保存一周)。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液器、乙醇浓硫酸(不允许快递)、研钵。 四、可溶性糖含量的测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 建议:选取样本做几个梯度的稀释,选取适合本次实验的稀释倍数 D① 组织样本: 称取 0.1g 样本(若是干样,如烘干烟叶等可取 0.05g;若是水分充足的样本可取 0.2g), 先加入 0.8mL 80%乙醇(自备:取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸馏水中),冰浴匀浆,倒 入有盖离心管中,再用 80%乙醇冲洗研钵并转移至同一 EP 管中,使 EP 管中粗提液终体 积定容为 1.5mL(若用自动研磨机可直接加入 1.5mL 80%乙醇研磨);置 50℃水浴 20min(封口膜缠紧,防止液体散失,且间隔 2min 振荡混匀一次),冷却后(若有损失, 可加 80%乙醇补齐至 1.5mL),12000rpm,室温离心 10min,取上清液备用。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细 胞至 EP 管中,加入 1.5mL 80%乙醇(自备:取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸馏水中)超 声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);置 50℃ 水浴 20min(封口膜缠紧,防止液体散失,且间隔 2min 振荡混匀一次),冷却后(若 有损失,可加 80%乙醇补齐至 1.5mL),12000rpm,室温离心 10min,取上清液备用。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本: 澄清的液体样本直接检测,若浑浊则需 12000rpm,室温离心 10min,取上清液备用。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 620nm本试剂盒仅供科研使用 2 ② 调节水浴锅至 95-100℃,工作液用前需*全溶解。 提示:大多数样本可溶性糖含量较高,为使ΔA 值在 1 以内,实验前可选取几个样本 做预测定,用蒸馏水把上清液稀释成不同浓度,找出适合本次检测样本的稀释倍数 D(强调:严禁稀释加热反应后的混合液,否则会出现浑浊现象)。 ④ 在 EP 管中依次加入试剂(μL测定管 空白管(仅做一次) 样本 25 0 蒸馏水 75 100 工作液 30 30 浓硫酸(缓慢加入) 250 250 混匀后,放入 95-100℃水浴中 10min(封口膜缠紧,防止 水分散失),冷却至室温后,取 200μL 转移至 96 孔板中, 620nm 读取吸光值 AΔA=A 测定管-A 空白管。 【注】 若ΔA 的值接近零,可增加样本加样体积 V1(如由 25μL 增至 50μL则蒸馏水相应减少),则改变后的 V1 代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准方程为 y = 2.0899x - 0.0103x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值ΔA2、按样本重量计算: 可溶性糖(mg /g 重量)=[(ΔA+0.0103)÷2.0899×V1]÷(W×V1÷V) ×D =0.718×(ΔA+0.0103)÷W×D 3、按质量分数(%)计算: 可溶性糖(%重量)=[(ΔA+0.0103)÷2.0899×V1]÷(W×V1÷V) ×10-3×100% =[0.0718×(ΔA+0.0103)÷W×D]% 4、按细菌/细胞数量计算: 可溶性糖(mg /104cell)=[(A+0.0103)÷2.0899×V1]÷(500×V1÷V)×D =0.00144×(ΔA+0.0103)×D 5、按液体体积计算: 可溶性糖(mg/mL)=(ΔA+0.0103)÷2.0899×D=0.479×(ΔA+0.0103)×D V---样品提取液总体积,1.5mLV1---测定时所取样本的体积,0.025mLW---样本质量,g500---细胞数量,万; D---自行稀释倍数,未稀释即为 1附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的标准品(母液需在两天内用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5. mg/mL3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

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