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还原糖含量试剂盒

更新时间:2024-06-13

简要描述:

还原糖含量试剂盒
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄 糖、果糖和麦芽糖等,是最常见的单糖和双糖。

还原糖含量试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 还原糖含量试剂盒说明书 (货号:WS2050F 分光法 48 样) 一、产品简介: 还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄 糖、果糖和麦芽糖等,是最常见的单糖和双糖。 在碱性条件下,DNS 试剂与还原糖共热生成棕红色氨基化合物,经过 480nm 540nm 波长扫描发现在 500nm 有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与 500nm 吸光 度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样品中还原糖的量。 二、测试盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 6mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、可调式移液器、研钵、乙醇四、还原糖含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取 0.1g 样本(若是干样,如烘干烟叶等可取 0.05g;若是水分充足的样本可取 0.2g), 先加入 0.8mL 80%乙醇(自备:取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸馏水中),冰浴匀浆,倒入 有盖离心管中,再用 80%乙醇冲洗研钵并转移至同一 EP 管中,使 EP 管中粗提液终体积 定容为 1.5mL(若用自动研磨机可直接加入 1.5mL 80%乙醇研磨);置 50℃水浴 20min (封口膜缠紧,防止液体散失,且间隔 2min 振荡混匀一次),冷却后(若有损失,可加 80%乙醇补齐至 1.5mL),12000rpm,室温离心 10min,取上清液备用。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 液体样本: 澄清的液体样本直接检测,若浑浊则需 12000rpm,室温离心 10min,取上清液备用。 2、上机检测1 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。 2 调节水浴锅至 95℃。 ③ 上清液稀释:可先取 2 个样本检测,确定适合本批样本的稀释浓度 D:叶片类样本可 稀释 10 倍,含糖量高的果肉类样本可稀释 20 倍左右。 ④ 在 EP 管中加入下列试剂: 试剂(μL测定管 空白管(仅做一次) 样本 100 蒸馏水 100 试剂一 100 100 混匀,在 95℃水浴中加热 10min(盖紧封口,防止水分散失), 取出后立即过冷水冷却至室温。 蒸馏水 1000 1000 混匀,全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中,500nm 读取吸光值 AΔA=A 测定-A 空白。 【注】:若ΔA 值大于 1.5,样本可用蒸馏水再稀释,稀释倍数 D 代入公式计算。本试剂盒仅供科研使用 五、结果计算: 1、 标准曲线方程为 y =1.3936x-0.0296x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值ΔA2、按样本重量计算: 还原糖(mg/g 重量)=[(ΔA+0.0296)÷1.3936×V1]÷(W×V1÷V)×D =1.076×(ΔA+0.0296)÷W×D 3、按质量分数(%)计算: 还原糖(%重量)=[(ΔA+0.0296)÷1.3936×V1]÷(W×V1÷V)×10-3×100% =[0.1076×(ΔA+0.0296)÷W×D]% 4、按液体体积计算: 还原糖(mg/mL)=(ΔA+0.0296)÷1.3936×D=0.7176×(ΔA+0.0296)×D V---样品提取液总体积,1.5mLV1---测定时所取样本的体积,0.1mLW---样本质量,gD---自行稀释倍数,未稀释即为 1附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在两天内用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可 根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。 2

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