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芳基酰胺酶活性测定试剂盒

更新时间:2024-06-12

简要描述:

芳基酰胺酶活性测定试剂盒
芳基酰胺酶(aryl-acylamidase) (EC 3. 5. 1.3),广泛存在于动物、植物、微生物中,可水 解带有酰胺基团的化合物

芳基酰胺酶活性测定试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 芳基酰胺酶活性测定试剂盒说明书 (货号:WS3340F 分光法 48 样) 一、产品简介: 芳基酰胺酶(aryl-acylamidase) (EC 3. 5. 1.3),广泛存在于动物、植物、微生物中,可水 解带有酰胺基团的化合物,是生物体内农药及其他外源物质的重要水解酶之一。 本试剂盒采用芳基酰胺酶水解底物产生对硝基苯胺,在波长 405nm 处有吸收峰。 通过检测生成的产物对硝基苯胺在 405nm 处的增长速率即可得出该酶活性大小。 二、测试盒组成和配制: 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL玻璃比色皿(光径1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、 研钵、乙醇、冰和蒸馏水。 四、芳基酰胺酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入: 【注】1. 加完试剂二即启动反应,所以试剂二加完混匀后立即检测,若 A2 值大于 1.5,可对样本 进行稀释,稀释倍数需代入公式重新计算。 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 30mL×1 4℃保存 试剂二 液体 8mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若要重新做标曲则用到该试剂。 试剂名称(μL测定管 试剂一 480 样本 160 试剂二 160 混匀,立即405nm处读取 A1值,37℃反应 30min 后读取 A2 值。ΔA=A2-A1本试剂盒仅供科研使用 2 2. ΔA小于0.005,可增大样本量V1(如增至320μL,试剂一相应减少),则改变后的V1 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 0.0117x + 0.0041x 为标准品(nmoL)y ΔA2、按样本鲜重计算: 酶活定义:在 37℃,每克组织每分钟催化产生 1nmoL 标准品定义为一个酶活单位(U)。 芳基酰胺酶(nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA-0.0041)÷0.0117]÷(W×V1÷V)÷T =17.806×(ΔA-0.0041)÷W 3、按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:在37℃,每毫克组织蛋白每分钟催化产生1nmoL标准品定义为一个酶活单位(U)。 芳基酰胺酶(nmoL/min/mg prot)= [(ΔA-0.0041)÷0.0117]÷(V1×Cpr)÷T =17.806×(ΔA-0.0041)÷Cpr 4、按细胞数量计算: 酶活定义:在 37℃,每 104个细胞每分钟催化产生 1nmoL 标准品定义为一个酶活单位(U)。 芳基酰胺酶(nmoL/min/104 cell)= [(ΔA-0.0041)÷0.0117]÷(500×V1÷V)÷T=0.0356×(ΔA-0.0041) 5、按照液体体积计算: 酶活定义:在 37℃,每毫升液体每分钟催化产生 1nmoL 标准品定义为一个酶活单位(U)。 芳基酰胺酶(nmoL/min/mL)= [(ΔA-0.0041)÷0.0117]÷V1÷T=17.806×(ΔA-0.0041) V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.16mLT---反应时间,30minW---样本质量,g500---细胞数量; Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(10μmol/mL):临用前甩几下或离心,使粉体落入底部,加入 0.1mL 乙醇,涡旋震荡溶解后再加入 0.9mL 的蒸馏水混匀,得到 10μmol/mL 备用。 2 用蒸馏水把母液稀释成以下浓度:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5μmol/mL。也可根据实际来 调整浓度。 3 160μL 标准品+640μL 试剂一,混匀后于 405nm 处读取 A 值,依据结果即可制作标 准曲线。

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