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尿素含量测定试剂盒(二乙酰一肟法),微板法

更新时间:2024-06-12

简要描述:

尿素含量测定试剂盒(二乙酰一肟法),微板法
在加热和强酸条件下,尿素与二乙酰一肟及安*比林反应呈黄色,在波长460 nm 处有特征吸收峰。

尿素含量测定试剂盒(二乙酰一肟法),微板法

尿素含量测定试剂盒(二乙酰一肟法),微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 尿素含量(二乙酰一肟法)检测试剂盒说明书 (货号:WS1440W 微板法 96 样) 一、产品简介: 在加热和强酸条件下,尿素与二乙酰一肟及安*比林反应呈黄色,在波长460 nm 处有特征吸收峰。通过检测 生成的黄色物质在460nm处的增加量进而得出样本中尿素含量。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 2mL×1 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,先加 2.4mL 蒸馏水溶解,再缓慢加 2.4mL 磷酸混匀,最后再加 4.8mL 硫酸混匀, 冷却至室温备用。 标准管 粉体 mg×2 4℃保存 临 用 前 每 支 加 1mL 蒸 馏 水 溶 解 4mg/mL), 再用蒸馏水稀释 40 1:39)成 0.1mg/mL三、所需仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、天平、移液器、离心机、蒸馏水。 四、尿素含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费! 1、样本制备: 0.1g 组织样本,加 1mL 的蒸馏水研磨,超声萃取 10min 后定容至 1mL,室温静置 30min12000rpm,常温 离心 10min,上清液待测。 2、上机检测: 1 酶标仪预热 30min,设置温度在 37℃,设定波长到 460nm2 做实验前选取 2 个样本,找出适合本次检测样本的稀释倍数 D3 所有试剂解冻至室温,在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL) 测定管 对照管 空白管 (仅做一次) 标准管 (仅做一次) 样本 50 50 蒸馏水 20 50 标准品 50 试剂一 20 20 20 试剂二 40 40 40 40 混匀,95℃沸水浴反应 20min 蒸馏水 190 190 190 190 混匀,(若浑浊则 5000rpm 室温离心 5min 后取上清液测定)取 200μL 96 孔板中,于 460nm 处读取吸光值 A,△A=A 测定-A 对照。 【注】:测定管的 A 值若超过 1.5,可把样本再进行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式。 五、结果计算: 1、按照组织质量计算: 尿素含量(mg/g)=(C 标准×V1)×A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×W)×D=0.1×A÷(A 标准-A 空白)÷W×D 尿素含量(mg/kg)=(C 标准×V1)×103×A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×W)×D=100×A÷(A 标准-A 空白)÷W×D C 标准---尿素标品浓度,0.1mg/mLD---稀释倍数,未稀释即为 160.04---尿素分子量; W---取样质量,gV---提取液体积,1mLV1---加入样本体积,0.05mL

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