产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 微板法 > 天冬酰胺合成酶(ASNS)试剂盒,微板法

天冬酰胺合成酶(ASNS)试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-07

简要描述:

天冬酰胺合成酶(ASNS)试剂盒,微板法
天冬酰胺合成酶(AS,EC 6.3.5.4) 广泛存在于植物和微生物体内

天冬酰胺合成酶(ASNS)试剂盒,微板法

天冬酰胺合成酶(ASNS)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 天冬酰胺合成酶(Asparagine SynthetaseAS)试剂盒说明书 (货号:WS9340W 微板法 96 样) 一、产品简介: 天冬酰胺合成酶(ASEC 6.3.5.4) 广泛存在于植物和微生物体内,是一个以氨或谷*酰 胺及天冬氨酸为底物催化合成天冬酰胺的关键酶,该酶对于研究植物营养有重要意义, 天冬酰胺合成酶(AS) 催化谷*酰胺的氨基转移到天冬氨酸形成天冬酰胺,同时生成*氨 酸;利用谷*酸脱氢酶作用于生成的谷*酸,同时使 NAD+还原成 NADH,通过测定 NADH 340nm 处的增加速率,进而得出天冬酰胺合成酶活性大小。 该酶催化反应:ATP+L-aspartate+L-glutamine+H2O=AMP+diphosphate+L-asparagine+L-glutamate二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,再 加入 12mL 蒸馏水溶解备用。 试剂二 粉体 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,再 加入 12mL 蒸馏水溶解备用。 试剂三 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,再 加入 12mL 蒸馏水溶解备用。 试剂四 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,再 加入 6mL 蒸馏水溶解备用。 试剂五 液体 50mL×1 4℃保存 试剂六 液体 4mL×1 4℃保存 试剂七 粉体 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,再 加入 2.2mL 蒸馏水溶解备用。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、天冬酰胺合成酶(AS)活性检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1样本制备: 称取约 0.1g 组织(水分多的样本取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取 2、上机检测① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 100 100 试剂一 50 50 试剂二 50 50 试剂三 50 50本试剂盒仅供科研使用 2 试剂四 50 试剂五 100 150 混匀,37℃下孵育 20 分钟 95℃沸水浴 3 分钟,上下混匀后,12000rpm 离心 5 分钟, 上清液待测。 ③ 在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 ②歩上清液 80 80 试剂五 90 90 试剂六 20 20 试剂七 10 10 混匀,37℃下孵育 30 分钟,于 340nm 处读吸光值 AA=A 测定-A 对照(每个样本需设一个自身对照 )。 【注】若△A 差值在零附近,可在③反应阶段增加上清液(V3)的量(如增加到 120-150μL则试剂五相应减少);或延长第②歩中 37℃反应时间 T(如由 20min 增加至 40min); 或增加②歩中样本加样体积 V1(如由 100μL 增至 200μL,则试剂五相应减少);则改 变后的 V3 T V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmoL NADH 定义为一个酶活力单位。 AS(nmol NADH/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V4×109]×(V2÷V3)÷(V1×Cpr) ÷T =160.8×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 单位定义:每克组织每分钟生成 1nmoL NADH 定义为一个酶活力单位。 AS(nmol NADH /min/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V4×109]×(V2÷V3)÷(W×V1÷V) ÷T =160.8×ΔA÷W V---加入提取液体积,1 mLV1---②步中加入样本体积,0.1mLV2---②步反应体系总体积,4×10-4 LV3---反应阶段中上清液0.8×10-4 LV4---③步反应体系总体积,2×10-4 Ld---96 孔板光径,0.5cmε---NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L/moL/cmW---样本质量,gT---反应时间,20minCpr---蛋白浓度(mg/mL),建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
上海宇淳生物科技有限公司

上海宇淳生物科技有限公司

地址:上海市南航公路1981弄72号

版权所有:上海宇淳生物科技有限公司  备案号:沪ICP备19012414号-1  总访问量:180835  站点地图  技术支持:环保在线  管理登陆