土壤多酚氧化酶(S-PPO)试剂盒,微板法

土壤多酚氧化酶(S-PPO)试剂盒,微板法

土壤多酚氧化酶(S-PPO)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）试剂盒说明书 (货号：WS1130W 微板法 96 样) 一、产品简介： 土壤多酚氧化酶(Polyphenoloxidase，简称 PPO)是一类以铜、锰为活性中心的氧化还原 酶，主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放的酶，能把土壤中芳 香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成大小分子 量不等有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，也可用于土壤环境修复。 土壤多酚氧化酶能够催化底物*旋多巴产生红色的醌类物质，依据文献选择该有色产物 在 475nm 做为特征光吸收波长，通过测定进而计算得出土壤多酚氧化酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 110mL×2 瓶 4℃保存 试剂二 粉体 mg×3 瓶 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部，每瓶 加入 30mL 试剂一，超声溶解，溶解 后的试剂三天内用完。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅/恒温振荡培养箱、可调式移液器。 四、土壤多酚氧化酶（S-PPO）的测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 取新鲜土样或风干土壤，先粗研磨，过 40 目筛网，待测备用。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 475nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.1 0.1 试剂一 200 1000 试剂二 800 振荡混匀，25℃水浴（间隔 10min 振荡混匀几下）或恒温振荡培养 箱振荡孵育 1 h 孵育结束后立即于 4℃（需低温）12000rpm 离心 5min，取 200μL 上清液于 96 孔板中，于 475nm 处读取吸光值 A，△A=A 测定管-A 对照管（每个样本需做一个自身对照）。 【注】：1. 若 A 测定大于 1.8，可用蒸馏水对离心后待检测的上清液进行稀释，则稀释倍数 D 需代入公 式重新计算。 2. 若△A 值小于 0.01，可延长 25℃的孵育时间 T（如由 1h 可增加至 4h），则改变后的 T 需代入 公式重新计算。 五、结果计算： 1、单位定义：每小时每克土壤中产生 1nmol 红色产物定义为一个酶活力单位。本试剂盒仅供科研使用 2 S-PPO 活力(nmol/h/g 土样)=[ΔA÷(ε×d)×V1×109]÷W÷T×D=540.5×△A÷W×D ε---红色产物摩尔吸光系数，3.7×103 L/mol/cm； T---反应时间，1h； V1---反应总体积，1000μL=1mL=1×10-3 L； d---光径，0.5cm； D---稀释倍数，未稀释即为 1； W---土壤样本实际取样量，g。