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土壤多酚氧化酶(S-PPO)试剂盒

更新时间:2024-06-06

简要描述:

土壤多酚氧化酶(S-PPO)试剂盒
土壤多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,简称 PPO)是一类以铜、锰为活性中心的氧化还原 酶,主要来源于土壤微生物

土壤多酚氧化酶(S-PPO)试剂盒

土壤多酚氧化酶(S-PPO)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidaseS-PPO)试剂盒说明书 (货号:WS1130F 分光法 48 ) 一、产品简介: 土壤多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,简称 PPO)是一类以铜、锰为活性中心的氧化还原 酶,主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放的酶,能把土壤中芳 香族化合物氧化成醌,醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成大小分子 量不等有机质和色素,完成土壤芳香族化合物循环,也可用于土壤环境修复。 土壤多酚氧化酶能够催化底物左*多巴产生红色的醌类物质,依据文献选择该有色产物 475nm 做为特征光吸收波长,通过测定进而计算得出土壤多酚氧化酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 110mL×1 4℃保存 试剂二 粉体 mg×2 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部,每瓶 加入 25mL 试剂一,超声溶解,溶解 后的试剂三天内用完。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、水浴锅/恒温振荡培养 箱、可调式移液器。 四、土壤多酚氧化酶(S-PPO的测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样或风干土壤,先粗研磨,过 40 目筛网,待测备用。 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 475nm,蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g0.1 0.1 试剂一 200 1000 试剂二 800 振荡混匀,25℃水浴(间隔 10min 振荡混匀几下)或者恒温振荡培 养箱振荡孵育 1 h 孵育结束后立即于 4℃(需低温)12000rpm 离心 5min,取 700μL 上清液至 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中,于 475nm 处读取吸光 AA=A 测定管-A 对照管(每个样本需做一个自身对照)。 【注】:1. A 测定大于 1.8,可用蒸馏水对离心后待检测的上清液进行稀释,则稀释倍数 D 需代入公 式重新计算。 2. A 值小于 0.01,可延长 25的孵育时间 T(如由 1h 可增加至 4h),则改变后的 T 需代入 公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、单位定义:每小时每克土壤中产生 1nmol 红色产物定义为一个酶活力单位。 S-PPO 活力(nmol/h/g 土样)=[ΔA÷(ε×d)×V1×109]÷W÷T×D=270.3×A÷W×D ε---红色产物摩尔吸光系数,3.7×103 L/mol/cmT---反应时间,1hV1---反应总体积,1000μL=1mL=1×10-3 Ld---光径,1cmD---稀释倍数,未稀释即为 1W---土壤样本实际取样量,g

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