土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒,微板法

土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒,微板法

土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤硝酸还原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）试剂盒说明书 (货号：WS9030W 微板法 48 样) 一、产品简介： 土壤硝酸还原酶可以把土壤中的硝酸盐转变为亚硝酸盐，然后再通过亚硝酸还原酶的作用 转变成氮循环的重要原料-铵，从而调节氮代谢，并影响到光合碳代谢，进而影响植物生长。 本试剂盒提供一种快速、精确的测定方法，土壤硝酸还原酶催化硝酸盐还原为亚硝酸盐； 同时抑制亚硝酸还原酶对产生的亚硝酸盐的降解，亚硝酸盐与对应的显色剂反应生成（粉） 红色偶氮化合物；该有色物质在 540nm 有最大吸收峰，进而得出土壤硝酸还原酶的活性。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格试剂名称 保存要求 备注 试剂一 液体 25mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 6mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 液体 60mL×1 瓶 4℃保存 试剂四 液体 7mL×1 瓶 4℃保存 试剂五 A 液 6mL×1 瓶 4℃保存 临用前，可依据待检测样本数量， 把A液和B液等比例混合成无色的 反应 mix（注意观察，若变粉色， 则不能使用）。 两天之内用完。 B 液 6mL×1 瓶 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、蒸馏水。 四、土壤硝酸还原酶（S-NR）的测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网，备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、测定步骤 ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。 ② 在 1mLEP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.25 0.25 试剂一 200 200 试剂二 50 50 蒸馏水 250 250 混匀，且务*用封口膜封 口。25℃培养 24h 混匀，且务*用封口膜封口。-20℃培 养 24h（可放在-20℃冰箱） 试剂三 500 500 混匀，12000rpm，4℃离心 10min，上清液待用本试剂盒仅供科研使用 2 ③ 显色反应，在 96 孔板中依次加入： 上清液 40 40 试剂四 60 60 反应 mix 100 100 混匀，25℃反应 5min（准确时间），立即于 540nm 处读取 A 值， △A=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照管）。 【注】：若△A 值低于 0.01，可增加③ 步中上清液的体积（如由 40μL 增至 100μL，则试剂四减至 0μL， 保持总体积仍为 200μL）。 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y =3.9669x - 0.0037；x 为标准品浓度（μmoL/mL），y 为吸光值△A。 2、单位定义：每天每克土样中产生 1μmoL 的 NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。 S-NR(μmoL/d/g 土样)=[(△A+0.0037)÷3.9669×V1]÷W÷T =0.252×(△A+0.0037)÷W 3、单位定义：每天每克土样中产生 1μg 的 NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。 S-NR(μg/d/g 土样)=[(△A+0.0037)÷3.9669×V1]÷W÷T×46 =11.6×(△A+0.0037)÷W V1---反应体系总体积，1mL； T---反应时间，24h=1d； W---样本实际质量，g； 标准品的分子量---69； NO2 -的分子量---46。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（100μmol/mL）：把标准品*全溶解于 1mL 蒸馏水中（母液需在两 天内用且-20℃保存）。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度标准品：0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2. μmol/mL。 也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据显色反应阶段的测定管的加样顺序操作，根据结果即可制作标准曲线。