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土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-06

简要描述:

土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒,微板法
土壤硝酸还原酶可以把土壤中的硝酸盐转变为亚硝酸盐,然后再通过亚硝酸还原酶的作用 转变成氮循环的重要原料-铵,从而调节氮代谢

土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒,微板法

土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤硝酸还原酶(Solid-Nitrate ReductaseS-NR)试剂盒说明书 (货号:WS9030W 微板法 48 ) 一、产品简介: 土壤硝酸还原酶可以把土壤中的硝酸盐转变为亚硝酸盐,然后再通过亚硝酸还原酶的作用 转变成氮循环的重要原料-铵,从而调节氮代谢,并影响到光合碳代谢,进而影响植物生长。 本试剂盒提供一种快速、精确的测定方法,土壤硝酸还原酶催化硝酸盐还原为亚硝酸盐; 同时抑制亚硝酸还原酶对产生的亚硝酸盐的降解,亚硝酸盐与对应的显色剂反应生成(粉) 红色偶氮化合物;该有色物质在 540nm 有最大吸收峰,进而得出土壤硝酸还原酶的活性。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格试剂名称 保存要求 备注 试剂一 液体 25mL×1 4℃保存 试剂二 液体 6mL×1 4℃保存 试剂三 液体 60mL×1 4℃保存 试剂四 液体 7mL×1 4℃保存 试剂五 A 6mL×1 4℃保存 临用前,可依据待检测样本数量, A液和B液等比例混合成无色反应 mix(注意观察,若变粉色, 则不能使用)。 两天之内用完。 B 6mL×1 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、蒸馏水。 四、土壤硝酸还原酶(S-NR)的测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网,备用。 【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、测定步骤 ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm② 在 1mLEP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g0.25 0.25 试剂一 200 200 试剂二 50 50 蒸馏水 250 250 混匀,且务*用封口膜封 口。25℃培养 24h 混匀,且务*用封口膜封口。-20℃培 24h(可放在-20℃冰箱) 试剂三 500 500 混匀,12000rpm4℃离心 10min,上清液待用本试剂盒仅供科研使用 2 ③ 显色反应,在 96 孔板中依次加入: 上清液 40 40 试剂四 60 60 反应 mix 100 100 混匀,25℃反应 5min(准确时间),立即540nm 处读取 A 值, A=A 测定-A 对照(每个样本做一个自身对照管)。 【注】:若A 值低于 0.01,可增加③ 步中上清液的体积(如由 40μL 增至 100μL,则试剂四减至 0μL保持总体积仍为 200μL)。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y =3.9669x - 0.0037x 为标准品浓度(μmoL/mL),y 为吸光值A2、单位定义:每天每克土样中产生 1μmoL NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。 S-NR(μmoL/d/g 土样)=[(A+0.0037)÷3.9669×V1]÷W÷T =0.252×(A+0.0037)÷W 3、单位定义:每天每克土样中产生 1μg NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。 S-NR(μg/d/g 土样)=[(A+0.0037)÷3.9669×V1]÷W÷T×46 =11.6×(A+0.0037)÷W V1---反应体系总体积,1mLT---反应时间,24h=1dW---样本实际质量,g标准品的分子量---69NO2 -的分子量---46附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(100μmol/mL):把标准品*全溶解于 1mL 蒸馏水中(母液需在两 天内用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度标准品:0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2. μmol/mL也可根据实际样本来调整标准品浓度。 3 依据显色反应阶段的测定管的加样顺序操作,根据结果即可制作标准曲线。

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