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土壤过氧化氢酶(S-CAT)试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-05

简要描述:

土壤过氧化氢酶(S-CAT)试剂盒,微板法
土壤过氧化氢酶主要分解土壤中的过氧化氢,降低土壤中过度累积的过氧化氢对植物根 系的危害。

土壤过氧化氢酶(S-CAT)试剂盒,微板法

土壤过氧化氢酶(S-CAT)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤过氧化氢酶(Solid-CatalaseS-CAT)试剂盒说明书 (货号:WS3030W 微板法 96 ) 一、产品简介: 土壤过氧化氢酶主要分解土壤中的过氧化氢,降低土壤中过度累积的过氧化氢对植物根 系的危害。本试剂盒提供一种简单,灵敏,快速的测定方法,即 CAT 催化过氧化氢产生水 与氧气,剩余的过氧化氢与一种高灵敏显色探针反应生成有色物质,其在 510nm 左右有最 大吸收峰。通过过氧化氢的减少量来计算土壤中 CAT 酶的活力。 本试剂盒突出特点是从紫外波长(240nm:过氧化氢的检测波长)转换到可见波长 510nm)检测,无需使用石英比色皿或 UV 板。而且由于过氧化氢极其不稳定,直接检 测造成读值不稳定,且蛋白质等组分在此紫外波长下也有光吸收,影响结果精确性。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格试剂名称 保存要求 备注 试剂一 液体×1 4℃保存 用前甩几下或者离心使试剂落入底 部,分别取出 40μL 六个新的 EP 中,再加 2mL 蒸馏水充分溶解备用。 试剂二 液体 22mL×1 室温 试剂三 液体 35mL×1 4℃保存 试剂四 液体 7mL×1 4℃保存 标准品 液体 1.5mL×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、蒸馏水。 四、土壤过氧化氢酶(Solid-CatalaseS-CAT)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网备用。 【注】:土壤风干,可减少土壤中水分对于实验的干扰;;土壤过筛,保证取样的均匀细腻; 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 510nm② 试剂一事先按照试剂配制要求配制好,再进行以下操作。 [建议]若一次性样本较多,离心数量有限,可分批操作,待一批样本加完试剂二开始离心时,再 进行下一批操作(土壤样本可一次性称完,分批按照加样表操作)。 ③ 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(µL测定管 无基质管 无土管 (仅做一次) 土样(g0.1 0.1 蒸馏水 800 800 800 室温(25℃)震荡(如:摇床)培养 30min试剂一 100 100 蒸馏水 100本试剂盒仅供科研使用 2 ④ 显(粉)色反应:在 96 孔板中依次加入: 【注】:1. 无土管的颜色最深,若测定管颜色很浅接近无色,说明样本里面过氧化氢酶含量很高,则震荡 10min 的时间缩短(如 5min)或减少土壤取样质量 W。则改变后的 T W 重新代入公式计算。 2. 若一次性检测样本较多,在显色反应阶段可酌情分批操作和读值,为保证数据的精确性,显色 反应阶段最好半个小时内完成。 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 0.1027x - 0.0318x 为标准品摩尔质量(µmol),y A2、单位定义:每小时每克土样催化 1µmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。 S-CAT(µmol/h/g 土样)=[(A+0.0318)÷0.1027]÷W÷T=58.4×(A+0.0318)÷W T---反应时间,10min=1/6hW---土壤样本实际取样量。 附:标准曲线制作过程: 1 把标准品(100µmol/mL)稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 20, 40, 60, 80, 100. µmol/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。 2 按照无土管加样顺序(100µL 试剂一换成 100µL 标准品,其他不变)依次加入试剂 测定,标准品的摩尔质量作为横坐标,吸光值作为纵坐标,即得标准曲线。 混匀,室温(25℃10min务必每隔 2min 摇晃一次)。 试剂二 100 100 100 12000rpm4℃或室温离心 10min,上清液务必全部转移至新的 EP 中,待测。 上清液 5 5 5 试剂三 165 165 165 试剂四 30 30 30 室温(25℃)静置 5min务必立即510nm 下读取吸光值 AA=A 无土管-A 测定管-A 无基质管)。


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