土壤过氧化氢酶(S-CAT)试剂盒

土壤过氧化氢酶(S-CAT)试剂盒

土壤过氧化氢酶(S-CAT)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤过氧化氢酶（Solid-Catalase，S-CAT）试剂盒说明书 (货号：WS3030F 分光法 48 样) 一、产品简介： 土壤过氧化氢酶主要分解土壤中的过氧化氢，降低土壤中过度累积的过氧化氢对植 物根系的危害。本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，即 CAT 催化过氧化 氢产生水与氧气，剩余的过氧化氢与一种高灵敏显色探针反应生成有色物质，其在 510nm 左右有最大吸收峰。通过过氧化氢的减少量来计算土壤中 CAT 酶的活力。 本试剂盒突出特点是从紫外波长（240nm：过氧化氢的检测波长）转换到可见波长 （510nm）检测，无需使用石英比色皿或 UV 板。而且由于过氧化氢极其不稳定，直接 检测造成读值不稳定，且蛋白质等组分在此紫外波长下也有光吸收，影响结果精确性。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格试剂名称 保存要求 备注 试剂一 液体×1 支 4℃保存 用前甩几下或者离心使试剂落入底 部，分别取出 15μL 至四个新的 EP 管 中，再加 1.5mL 蒸馏水充分溶解备用。 试剂二 液体 12mL×1 支 室温 试剂三 液体 100mL×1 瓶 4℃保存 试剂四 液体 16mL×1 瓶 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、 蒸馏水。 四、土壤过氧化氢酶（Solid-Catalase，S-CAT）活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网，备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；；土壤过筛，保证取样的均匀细腻； 2、上机检测： ① 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 510nm，蒸馏水调零。 ② 试剂一事先按照试剂配制要求配制好，再进行以下操作。 [建议]：若一次性样本较多，离心数量有限，可分批操作，待一批样本加完试剂二开始离心时，再 进行下一批操作（土壤样本可一次性称完，分批按照加样表操作）。 ③ 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（µL） 测定管 无基质管 无土管 （仅做一次） 土样（g） 0.1 0.1 蒸馏水 800 800 800 室温（25℃）震荡（如：摇床）培养 30min， 试剂一 100 0 100本试剂盒仅供科研使用 2 ④ 显色反应：在 EP 管中依次加入： 【注】：1. 无土管的颜色最深，若测定管颜色很浅接近无色，说明样本里面过氧化氢酶含量很高，则反应 10min 的时间缩短（如 5min）或减少土壤取样质量 W。则改变后的 T 和 W 重新代入公式计算。 2. 若一次性检测样本较多，在显色反应阶段可酌情分批操作和读值，为保证数据的精确性，显色 反应阶段最好半个小时内完成。 五、结果计算： 1、标准曲线：y = 0.1677x - 0.0457；x 为标准品摩尔质量（µmol），y 为ΔA。 2、单位定义：每小时每克土样催化 1µmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。 S-CAT(µmol/h/g 土样)=[(△A+0.0457)÷0.1677]÷W÷T=35.8×(△A+0.0457)÷W T---反应时间，10 min=1/6h； W---土壤样本实际取样量，g。 附：标准曲线制作过程： 1 把标准品（100µmol/mL）稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 20, 40, 60, 80, 100. µmol/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。 2 按照无土管加样顺序（100µL 试剂一换成 100µL 标准品，其他不变）依次加入试剂 测定，标准品的摩尔质量作为横坐标，吸光值作为纵坐标，即得标准曲线。 蒸馏水 0 100 混匀，室温（25℃）10min（务必每隔 2min 摇晃一次）。 试剂二 100 100 100 12000rpm，4℃或室温离心 10min，上清液务必全部转移至新的 EP 管中，待测。 上清液 25 25 25 试剂三 825 825 825 试剂四 150 150 150 室温（25℃）静置 3min，全部转移到 1mL 的玻璃比色皿（光径 1cm） 中，务必立即在 510nm 下读取吸光值 A，△A=A 无土管-(A 测定管-A 无基质管)。