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谷an酰胺合成酶(GS)试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-03

简要描述:

谷an酰胺合成酶(GS)试剂盒,微板法
谷胺酰胺合成酶(GS,EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,植物吸收的 无机氮经硝酸还原酶(NR)和亚硝酸还原酶(NIR)还原成 NH4+后,通过谷胺酰胺合成酶(GS)参与的 GS/GOGAT 途径才能进行氮素的同化和利用。

谷an酰胺合成酶(GS)试剂盒,微板法

谷an酰胺合成酶(GS)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 谷胺酰胺合成酶Glutamine synthetaseGS试剂盒说明书 (货号:WS1040W 微板法 96 样) 一、产品简介: 谷胺酰胺合成酶(GSEC 6.3.1.2主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,植物吸收的 无机氮经硝酸还原酶(NR)和亚硝酸还原酶(NIR)还原成 NH4+后,通过谷胺酰胺合成酶(GS)参与的 GS/GOGAT 途径才能进行氮素的同化和利用。 谷胺酰胺合成酶(GS)在 ATP Mg2+存在下,催化铵离子和谷*酸合成*氨酰胺;谷*酰胺进一步转 化为γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下形成的络合物在 540nm 处有最大吸收峰,进而得到谷胺酰胺合 成酶(GS)的酶活性大小。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体120mL×14℃保存 试剂一 液体 34mL×1 4℃保存 临用前 37℃预热 10min,充分混匀 试剂二 液体 34mL×1 4℃保存 临用前 37℃预热 10min,充分混匀 试剂三 粉剂 mg×2 -20℃保存 用前甩几下或 4℃离心使试剂落入试管底 部,每瓶再加入 13mL 蒸馏水充分溶解待 用,仍-20℃保存。 试剂四 液体 45mL×1 4℃保存 []:粉剂量在 mg 级别,使用前用手甩几次或者进行离心,打开直接加入要求的试剂即可。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、谷胺酰胺合成酶(GS)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm4℃离心 10min,取 上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌/细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液; 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次), 12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例提取。 2、 上机检测① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm② 在 EP 管中依次加入: 试剂(μL测定管 对照管 样本 200 200 试剂一 320 试剂二 320本试剂盒仅供科研使用 2 试剂三 120 120 混匀,37℃水浴 30min 试剂四 200 200 混匀,反应 2min8000rpm4℃离心 10min,取 200μL 上清液 96 孔板中,540nm 处分别读取吸光值 AA=A 测定管-A 照管(每个测定管须设一个对应的对照管)。 【注】:若A 值低于 0.005,可增加样本加样体积 V1(如由 200μL 增至 400μL,则试剂一和试 剂二相应减少 120μL,试剂三相应减少 80μL),保持反应总体积不变。或增加样本取样 质量 W(由 0.1g 增加到 0.2g 或更高)。则改变后的 V1 W 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 单位定义:每毫克组织蛋白在每分钟内使 A540 吸光值变化 0.005 定义为一个酶活力单位。 GS(U/mg prot)=ΔA÷(Cpr×V1)÷0.005÷T =33.3×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 单位定义:每克组织在每分钟内使 A540 吸光值变化 0.005 定义为一个酶活力单位。 GS(U/g 鲜重)=ΔA÷(W×V1÷V)÷0.005÷T =33.3×ΔA÷W 3、按细菌或细胞密度计算: 单位定义:每百万细菌或细胞在每分钟内使 A540 吸光值变化 0.005 定义为一个酶活力单位。 GS(U/104 cell)=ΔA÷0.005÷(500×V1÷V)÷T=0.07×ΔA V----加入提取液体积,1 mLV1----加入样本体积,0.2mLT----反应时间,30 minW----样本质量,g500----细胞数量,百万; Cpr----样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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