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钙含量检测试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-30

简要描述:

钙含量检测试剂盒,微板法
钙(Calcium)是一种金属元素,常温下呈银白色晶体,动物的骨骼、蛤壳、蛋壳都含 有碳酸钙。检测生命体钙含量,主要通过检测钙离子浓度实现的。

钙含量检测试剂盒,微板法

钙含量检测试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 钙含量(邻甲*酞络合铜比色法)检测试剂盒说明书 (货号:WS8121W 微板法 96 样) 一、产品简介: (Calcium)是一种金属元素,常温下呈银白色晶体,动物的骨骼、蛤壳、蛋壳都含 有碳酸钙。检测生命体钙含量,主要通过检测钙离子浓度实现的。 本试剂盒利用溶液中钙离子在碱性条件下能与邻甲酚*络合铜(OCPC)结合,生成紫 红色的络合物,加入镁离子螯合剂,去除镁离子背景干扰。通过检测生成有色络合物于 575nm 处的吸光值,即可计算出总钙含量。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 11mL×1 4℃保存 试剂二 液体 11mL×1 4℃保存 标准品 液体 1mL×1 4℃保存 2.5mmol/L 的钙标准品。 三、所需仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水(无钙离子)。 四、钙含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、 样本制备: ① 液体样品:澄清的液体样本如血清可直接检测。 ② 组织样本:取约 0.1g 组织样本,加 1mL 生理盐水研磨,粗提液全部转移到 EP 管中, 12000rpm,常温离心 10min,上清液待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ③ 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或 细胞加入 1mL 生理盐水,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间 10s,重复 30 次);12000rpm 离心 10min,取上清待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min,设定波长到 575nm② 所有试剂解冻至室温,按照试剂一:试剂二为 1:1 配制反应 mix4℃避光保存三天)。 ③ 在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL) 测定管 标准管 (仅测一次) 空白管 (仅测一次) 样本 5 标准品 5 蒸馏水 5 反应 mix 200 200 200本试剂盒仅供科研使用 2 【注】:1. 测定管的 A 值若超过 1,可把样本用蒸馏水稀释后测定,稀释倍数 D 代入计算公式。 2. A 测定值接近 A 空白值,则可以增加样本加样体积 V1(如增至 25μL,则反应 mix 180μL;标准管仍为 5μL,蒸馏水 20μL,反应 mix 180μL;空白管为蒸馏水 25μL反应 mix 180μL),则改变后的 V1 需带入公式计算。 五、结果计算: 1.按液体体积计算: 钙含量(mmol/L)=(C 标准×V )×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =2.5×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D 2.按样本质量计算: 钙含量(μmol/g)=(C 标准×V )×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =2.5×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷W×D 3、按细胞数量计算: 钙含量(nmol/104 cell)=(C 标准×V ) ×103×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D =5×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)×D C 标准---钙标品浓度,2.5mmol/L=2.5μmol/mLV ---标准品加入体积,0.005mLD---稀释倍数,未稀释即为 1V1---加入样本体积,0.005mLV---提取液体积,1mLW---取样质量,g500---细胞数量,万。 混匀,室温放置 2min,于波长 575nm 处读取各管吸光度 A

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