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总蛋白酶活性试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-29

简要描述:

总蛋白酶活性试剂盒,微板法
蛋白酶活力通常利用天然底物和合成底物进行测定。各种蛋白酶均可水解天然底物 酪蛋白因此由酪蛋白测得的活力是蛋白酶的总活力。

总蛋白酶活性试剂盒,微板法

总蛋白酶活性试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 总蛋白酶试剂盒说明书 (货号:WS3121W 微板法 48 ) 一、产品简介: 蛋白酶活力通常利用天然底物和合成底物进行测定。各种蛋白酶均可水解天然底物 酪蛋白因此由酪蛋白测得的活力是蛋白酶的总活力。 本试剂盒利用总蛋白酶催化水解偶氮酪蛋白,生成的产物于 366nm 有光吸收,通 过测定吸光值的变化得出总蛋白酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存条件 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 粉体 mg×1 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部, 再加13mL的蒸馏水混匀备用。 试剂二 液体 12mL×1 4℃保存 试剂三 液体 36mL×1 4℃保存 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。 四、总蛋白酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 细菌/细胞样本:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或 细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);4℃×12000rpm 离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 366nm② 所有试剂解冻至室温或于 25℃水浴锅中孵育 20min③ 在 EP 管中依次加入:本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 120 120 试剂一 120 试剂二 120 120 混匀,30℃孵育 60min 试剂三 360 360 试剂一 120 立即混匀,低温(放冰上)静置 5min;室温 12000rpm 离心 5min,直接取 200μL 96 孔板中,于 366nm 处读 值。ΔA=A 测定-A 对照(每个样本做一个自身对照)【注】:若ΔA 在零附近徘徊,可以延长 30℃孵育时间 T(如延长至 90min)或增加样本取样 质量 W(如增至 0.2g),则改变后的反应时间 T W 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本鲜重计算: 定义:每克组织每小时反应体系中变化 1 个吸收单位定义为 1 个偶氮酪蛋白单位。 总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/g 鲜重)=ΔA÷1÷(W×V1÷V)÷T=8.3×ΔA÷W 2、按样本蛋白浓度计算: 定义:每毫克组织蛋白每小时反应体系中变化 1 个吸收单位定义为 1 个偶氮酪蛋白单位。 总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/mg prot)=ΔA÷1÷(V1×Cpr)÷T=8.3×ΔA÷Cpr 3、按细菌/细胞数量计算: 定义:每 104个细菌/细胞每小时反应体系中变化 1 个吸收单位为 1 个偶氮酪蛋白单位。 总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/104 cell)=ΔA÷1÷(500×V1÷V)÷T=0.02×ΔA÷Cpr 4、按照液体体积计算: 定义:每毫升液体每小时反应体系中变化 1 个吸收单位定义为 1 个偶氮酪蛋白单位。 总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/mL)=ΔA÷1÷V1÷T=8.3×ΔA V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.12mLW---样本质量,gT---反应时间,60min=1h500---细胞数量,万; Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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