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糜蛋bai酶试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-29

简要描述:

糜蛋bai酶试剂盒,微板法
糜*白酶(EC 3.4.21.1)又称胰*乳蛋白酶,是胰腺分泌的一种蛋白水解酶,具有肽链 内切酶的作用,通过切断蛋白质肽链中*氨酸、苯丙*酸的羧端肽链作用,专一水解羧端芳 香族氨基酸。

糜蛋bai酶试剂盒,微板法

糜蛋bai酶试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 糜*白酶/胰凝*蛋白酶(Chymotrypsin)试剂盒说明书 (货号:WS1121W 微板法 96 ) 一、产品简介: 糜*白酶(EC 3.4.21.1)又称胰*乳蛋白酶,是胰腺分泌的一种蛋白水解酶,具有肽链 内切酶的作用,通过切断蛋白质肽链中*氨酸、苯丙*酸的羧端肽链作用,专一水解羧端芳 香族氨基酸。临床上糜*白酶用于痰液稀化,对脓性和非脓性痰液均有效;也用于创伤或手 术后伤口愈合。 本试剂盒采用糜蛋*酶催化水解 N-琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-苯丙*酸对硝基酰苯 胺(SAAPFpNA)生成对硝基苯胺,后者在 405nm 有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速 率即可得出糜*白酶的活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存条件 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 液体 15mL×1 4℃保存 试剂二 液体 0.6mL×1 -20℃保存 若凝固则可于 37℃水浴至融化, 再加 3.8mL 蒸馏水混匀备用。 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重做标曲,则用到该试剂。 三、所需的主要仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。 四、糜蛋*酶/胰凝*蛋白酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定了解本批样品情况熟悉实验流程避免实 验样本和试剂浪费1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4℃×4000rpm 离心 5min,取上 清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 液体样本:若是澄清液体,直接检测,若液体样本浑浊,需 4℃×12000rpm,离心 10min取上清液检测。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm② 所有试剂解冻至室温。在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 30 试剂一 130 试剂二 40 混匀, 立即于 405nm 处测定吸光值 A137℃ 条件下反应 5min 后读取 A2ΔA=A2-A1本试剂盒仅供科研使用 2 【注】1 .ΔA 在零附近徘徊,可以延长反应时间 T(如延长至 10min 后读取 A2)或增加样本量 V1(如增 60μL,则试剂一相应减少),则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 2. ΔA 大于 0.5,可缩短反应时间 T(如缩至 2min 后读取 A2)或减少样本量 V1(如减至 10μL则试剂一相应增加),则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线:y = 0.0259x - 0.001x 为标准品(nmoL)y ΔA2、按样本鲜重计算: 单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位(U)。 糜*白酶/胰凝乳*白酶(nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷(W×V1÷V)÷T =257.4×(ΔA+0.001)÷W 3、按样本蛋白浓度计算: 单位定义:每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺为一个酶活单位(U)。 糜*白酶/胰凝乳*白酶(nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷(V1×Cpr)÷T =257.4×(ΔA+0.001)÷Cpr 4、按照液体体积计算: 单位定义:每毫升液体每分钟催化产生 1nmoL 对硝基苯胺定义为一个酶活单位(U)。 糜蛋*酶/胰凝乳*白酶(nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷V1÷T=257.4×(ΔA+0.001) V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.03 mLW---样本质量,gT---反应时间,5minCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒; 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(50μmol/mL):临用前甩几下或离心,使粉体落入底部,加入 0.5mL 乙醇,涡旋震荡溶解后再加入 0.5mL 的蒸馏水混匀,得到 50μmol/mL 备用。 2 用蒸馏水把母液稀释成以下浓度:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1μmol/mL。也可根据实际来调 整浓度。 3 30μL 标准品+170μL 试剂一,混匀后于 405nm 处读取 A 值,依据结果即可制作标准 曲线。

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