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糜蛋bai酶试剂盒

更新时间:2024-05-29

简要描述:

糜蛋bai酶试剂盒
糜*白酶(EC 3.4.21.1)又称胰凝*蛋白酶,是胰腺分泌的一种蛋白水解酶,具有肽链 内切酶的作用,通过切断蛋白质肽链中酪*酸、苯丙*酸的羧端肽链作用,专一水解羧端芳 香族氨基酸。

糜蛋bai酶试剂盒

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本试剂盒仅供科研使用 1 糜蛋*酶/胰凝乳*白酶(Chymotrypsin)试剂盒说明书 (货号:WS1121F 分光法 24 ) 一、产品简介: 糜*白酶(EC 3.4.21.1)又称胰凝*蛋白酶,是胰腺分泌的一种蛋白水解酶,具有肽链 内切酶的作用,通过切断蛋白质肽链中酪*酸、苯丙*酸的羧端肽链作用,专一水解羧端芳 香族氨基酸。临床上糜*白酶用于痰液稀化,对脓性和非脓性痰液均有效;也用于创伤或手 术后伤口愈合。 糜蛋*酶可催化酪蛋白水解生成含酚的氨基酸,含酚的氨基酸与福林酚反应后显蓝色; 其颜色的深浅与胃*白酶活性呈正比。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存条件 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 粉体 mg×1 4℃保存 临用前加 2.8mL 的试剂四,再加 5.6mL 的试剂二沸水加热,涡旋 振荡(反复几次)直到全部溶解, 再加 24mL 的试剂二混匀,配置 完的试剂 4保存,三天内用完。 试剂二 液体 30mL×1 4℃保存 试剂三 液体 5mL×1 4℃保存 试剂四 液体 8mL×1 4℃保存 试剂五 液体 10mL×1 4℃保存 标准品 液体 2mL×1 4℃保存 质控品 粉体 mg×1 4℃保存 若用该试剂,则用前加 1mL 蒸馏 水溶解,再用蒸馏水稀释 10 倍, 即 0.1mg/mL 的糜*白酶。 三、所需的主要仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液器、天平 四、糜*白酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4×4000rpm 离心 5min,取 上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 液体样本:液体用提取液按照 1:1 的比例混合稀释后,4℃×4000rpm,离心 5min取上清液检测。 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 680nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温。本试剂盒仅供科研使用 2 ③ 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 100 100 试剂一 500 试剂三 100 37℃孵育 10min 试剂三 100 试剂一 500 37℃孵育 10min4000rpm 室温离心 10min,上清液待测 ④ 显色反应,在 EP 管中: 试剂名称(μL测定管 对照管 标准管 (只做一次) 空白管 (只做一次) 上清液 200 200 标准品 200 提取液 200 蒸馏水 200 200 200 200 试剂四 100 100 100 100 试剂五 200 200 200 200 37℃孵育 20min 后(若浑浊则室温 4000rpm 离心 5min),全部上清液转移至 1mL 玻璃比色皿中,于 680nm 处读取各管的吸光值 A。ΔA=A 测定-A 对照。 【注】1. ΔA 在零附近徘徊,可以延长反应时间 T(如 37℃孵育 10min 延长至 20min)或增加样本 V1(如增至 200μL,则试剂一相应减少),则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计 算公式重新计算。 2. A 测定值大于 1.5,可以减少样本量 V1(如减至 50μL,用提取液相应补充),则改变后 的样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:37℃每毫克蛋白每分钟催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸为 1 个酶活单位(U)糜*白酶(U/mg prot=[ΔA÷A 标准-A 空白)×C 标准×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T =35×ΔA÷A 标准-A 空白)÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 酶活定义:37℃每 g 组织每分钟催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸为 1 个酶活单位(U)糜蛋*酶(U/g 鲜重)=[ΔA÷A 标准-A 空白)×C 标准×V2]÷(W×V1÷V) ÷T =35×ΔA÷A 标准-A 空白)÷W 3、液体中酶活力的计算: 酶活定义:37℃每毫升液体每分钟催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸为 1 个酶活单位(U)糜蛋白*(U/mL=[ΔA÷A 标准-A 空白)×C 标准×V2]÷V1÷T =35×ΔA÷A 标准-A 空白) V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.1mLV2---第③歩反应总体积,0.7mLT---反应时间,10minC 标准---50μg/mLW---样本质量,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒

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