更新时间:2024-05-28
肌酸(Creatine)含量试剂盒(肌酸酶法)微板法肌酸是一种内源性化合物,其功能是通过肌酸激酶的磷酸化使机体维持高的ATP/ADP 比率。肌酸补充剂是一种运动性能增强剂,亦用于治疗肌肉和神经退行性等疾病。
肌酸(Creatine)含量试剂盒(肌酸酶法)微板法
肌酸(Creatine)含量试剂盒(肌酸酶法)微板法
本试剂盒仅供科研使用 1 肌酸含量(酶法)检测试剂盒说明书 (货号:WS3021W 微板法 96 样) 一、产品简介: 肌酸是一种内源性化合物,其功能是通过肌酸激酶的磷酸化使机体维持高的ATP/ADP 比率。肌酸补充剂是一种运动性能增强剂,亦用于治疗肌肉和神经退行性等疾病。因此 肌酸的检测在研究和开发中具有广泛的应用。 本试剂盒利用肌酸酶特异作用于肌酸生成肌氨酸,肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生 成过氧化氢,过氧化氢与显色剂反应呈现(粉)红色,该有色物质在520nm有最大吸收 峰,进而计算得到肌酸含量。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 11mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 8mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 粉体 mg×1 支 -20℃保存 临用前甩几下使液体落入底部, 再加 1.1mL 的蒸馏水溶解备用。 试剂四 粉体 mg×1 支 -20℃保存 临用前甩几下使液体落入底部, 再加 1.1mL 的蒸馏水溶解备用。 标准管 液体 1mL×1 支 4℃保存 临用前用蒸馏水稀释2倍, 即0.5mg/mL肌酸溶液 三、所需仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水。 四、肌酸含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、 样本制备: ① 组织样本: 取约 0.1g 组织样本,加 1mL 的提取液研磨,粗提液全部转移到 EP 管中,12000rpm, 常温离心 10min,上清液待测。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样品:澄清的液体可直接检测;若浑浊则离心后取上清液检测。本试剂盒仅供科研使用 2 2、上机检测: ①酶标仪预热 30min,设置温度在 37℃,设定波长到 520nm。 ②做实验前选取 2 个样本,找出适合本次检测样本的稀释倍数 D。 ③所有试剂解冻至室温,在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL) 测定管 空白管 (仅做一次) 标准管 (仅做一次) 样本 10 蒸馏水 10 标准品 10 试剂一 100 100 100 试剂二 70 70 70 试剂三 10 10 10 混匀,37℃避光孵育 10min, 试剂四 10 10 10 混匀,37℃避光反应 30min,520nm 处读取吸光值 A(直到 A 值不变), △A=A 测定-A 空白。 【注】:1. 测定管的 A 值若超过 1,可用蒸馏水对样本进行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式。 2. 若△A 的值小于 0.005,可增加样本加样体积 V1(如由 10μL 增至 50μL,则试剂一相应 减少),或增加样本取样质量 W;则改变后的 V1 和 W 需代入公式重新计算。 3. 若样本自身含有高的肌氨酸含量,需增设一个样本自身对照: (即 10μL 样本+110μL 试剂一+70μL 试剂二+10μL 试剂三),△A=A 测定-A 对照。 五、结果计算: 1、按照质量计算: 肌酸含量(μmol/g)=(C 标准×V1)×△A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×W)×D×103÷Mr =3.81×△A÷(A 标准-A 空白)×D÷W 2、按细胞数量计算: 肌酸含量(nmol/104 cell)=(C 标准×V1)×△A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×500)×D×106÷Mr =7.63×△A÷(A 标准-A 空白)×D 3、按照体积计算: 肌酸含量(μmol/L)=(C 标准×V1)×△A÷(A 标准-A 空白)÷V1×D×106÷Mr =3813×△A÷(A 标准-A 空白)×D C 标准---标品浓度,0.5mg/mL; Mr---标准品分子量,131.13; V---提取液体积,1mL; V1---加入样本体积,0.01mL; 500---细胞数量,百万; D---稀释倍数,未稀释即为 1。