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肌酸(Creatine)含量试剂盒(肌酸酶法)

更新时间:2024-05-28

简要描述:

肌酸(Creatine)含量试剂盒(肌酸酶法)
肌酸是一种内源性化合物,其功能是通过肌酸激酶的磷酸化使机体维持高的ATP/ADP 比率。肌酸补充剂是一种运动性能增强剂,亦用于治疗肌肉和神经退行性等疾病。

肌酸(Creatine)含量试剂盒(肌酸酶法)

肌酸(Creatine)含量试剂盒(肌酸酶法)

本试剂盒仅供科研使用 1 肌酸含量(酶法)检测试剂盒说明书 (货号:WS3021F 分光法 48 样) 一、产品简介: 肌酸是一种内源性化合物,其功能是通过肌酸激酶的磷酸化使机体维持高的ATP/ADP 比率。肌酸补充剂是一种运动性能增强剂,亦用于治疗肌肉和神经退行性等疾病。因此 肌酸的检测在研究和开发中具有广泛的应用。 本试剂盒利用肌酸酶特异作用于肌酸生成肌氨酸,肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生 成过氧化氢,过氧化氢与显色剂反应呈现(粉)红色,该有色物质在520nm有最大吸收 峰,进而计算得到肌酸含量。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 液体 22mL×1 4℃保存 试剂二 液体 15mL×1 4℃保存 试剂三 粉体 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使液体落入底部, 再加 1.1mL 的蒸馏水溶解备用。 试剂四 粉体 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使液体落入底部, 再加 1.1mL 的蒸馏水溶解备用。 标准管 液体 1mL×1 4℃保存 临用前用蒸馏水稀释5倍, 0.2mg/mL肌酸溶液 三、所需仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调式移液器、离心机、蒸馏水。 四、肌酸含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、 样本制备: 组织样本: 取约 0.1g 组织样本,加 1mL 的提取液研磨,粗提液全部转移到 EP 管中,12000rpm常温离心 10min,上清液待测。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样品:澄清的液体可直接检测;若浑浊则离心后取上清液检测。本试剂盒仅供科研使用 2 2、上机检测: ①可见分光光度计预热 30min,设置温度在 37℃,设定波长到 520nm,蒸馏水调零。 ②做实验前选取 2 个样本,找出适合本次检测样本的稀释倍数 D③所有试剂解冻至室温,在 EP 管中依次加入: 试剂名称 μL测定管 空白管 (仅做一次) 标准管 (仅做一次) 样本 40 蒸馏水 40 标准品 40 试剂一 420 420 420 试剂二 300 300 300 试剂三 20 20 20 混匀,37℃避光孵育 10min试剂四 20 20 20 混匀,37℃避光反应 30min,全部液体转移至 1mL 玻璃比色 皿中,于 520nm 处读取吸光值 A(直到 A 值不变), A=A 测定-A 空白。 【注】:1. 测定管的 A 值若超过 1,可把样本再进行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式。 2. A 的值小于 0.005,可增加样本加样体积 V1(如由 40μL 增至 100μL,则试剂一相 应减少),或增加样本取样质量 W;则改变后的 V1 W 需代入公式重新计算。 2. 若样本自身含有高的肌氨酸含量,需增设一个样本自身对照: (即 40μL 样本+440μL 试剂一+300μL 试剂二+20μL 试剂三),A=A 测定-A 对照。 五、结果计算: 1、按照质量计算: 肌酸含量(μmol/g)=(C 标准×V1)×A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×W)×D×103÷Mr =1.53×A÷(A 标准-A 空白)×D÷W 2、按细胞数量计算: 肌酸含量(nmol/104 cell)=(C 标准×V1)×A÷(A 标准-A 空白)÷(V1÷V×500)×D×106÷Mr =3.05×A÷(A 标准-A 空白)×D 3、按照体积计算: 肌酸含量(μmol/L)=(C 标准×V1)×A÷(A 标准-A 空白)÷V1×D×106÷Mr =1525.2×A÷(A 标准-A 空白)×D C 标准---标品浓度,0.2mg/mLMr---标准品分子量,131.13V---提取液体积,1mLV1---加入样本体积,0.04mL500---细胞数量,百万; D---稀释倍数,未稀释即为 1

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