尿酸(UA)含量试剂盒(尿酸酶比色法),微板法

尿酸(UA)含量试剂盒(尿酸酶比色法),微板法

尿酸(UA)含量试剂盒(尿酸酶比色法),微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 尿酸含量（尿酸酶法）检测试剂盒说明书 （货号：WS2021W 微板法 96 样） 一、产品简介： 尿酸是嘌呤代谢的最终产物，并通过肾脏过滤排泄到尿液中。许多肾脏疾病会影响尿 酸水平，所以尿酸测定在诊断和评估肾脏疾病中具有重要作用。 本试剂盒利用尿酸酶特异作用于尿酸，氧化产生的产物与显色剂反应呈现的（粉）红 色，该有色物质在520nm有最大吸收峰，进而计算得到尿酸含量。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 110mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 14mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 8mL×1 瓶 4℃保存 试剂三 粉体 mg×1 支 -20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部，再 加 1.1mL 的试剂一溶解备用。 标准管 粉体 mg×1 支 4℃保存 临用前加2mL试剂一超声*全溶 解，即0.2mg/mL尿酸溶液，再用蒸 馏水稀释2倍即0.1mg/mL备用。 三、所需仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水。 四、尿酸含量检测： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实 验样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 液体样品： 澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。 ② 组织样本： 取约 0.1g 组织样本，加 1mL 的提取液研磨，粗提液全部转移到 EP 管中，12000rpm， 常温离心 10min，上清液待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。 ③ 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。本试剂盒仅供科研使用 2 2、上机检测： ①酶标仪预热 30min，设置温度在 37℃，设定波长到 520nm。 ②做实验前选取 2 个样本，找出适合本次检测样本的稀释倍数 D。 ③所有试剂解冻至室温，在 96 孔板中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 空白管 （仅做一次） 标准管 （仅做一次） 样本 10 蒸馏水 10 标准品 10 试剂一 100 100 100 试剂二 80 80 80 混匀，37℃避光孵育 5min，于 520nm 处读取吸光值 A1。 试剂三 10 10 10 混匀，37℃避光反应 10min，520nm 处读取吸光值 A2（直到 A2 值不变），ΔA =A2-A1。 【注】：1. 测定管的 A 值若超过 1，可把样本再进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。 2. 若△A 的差值在零附近徘徊，可增加样本加样量 V1（如增至 40μL，则试剂一相应减少， 保持总体积不变），则改变后的 V1 需代入公式重新计算。 五、结果计算： 1、按液体体积计算： 尿酸含量(mg/mL)=(C 标准×V 标)×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)÷V1×D =0.1×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)×D 尿酸含量(μmol/L)=(C 标准×V 标)×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)÷V1×D×106÷Mr =0.1×106÷Mr×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)×D 2、按样本鲜重计算： 尿酸含量(mg/g)=(C 标准×V 标)×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)÷(W×V1÷V)×D =0.1×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白) ÷W×D 3、按细胞数量计算： 尿酸含量(μg/104 cell)=(C 标准×V 标) ×103×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)÷(500×V1÷V)×D =0.2×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)×D C 标准---尿酸标品浓度，0.1mg/mL； D---稀释倍数，未稀释即为 1； V 标---加入样本体积，0.01mL； V1---加入样本体积，0.01mL； V---提取液体积，1mL； W---取样质量，g； 500---细胞数量，万； Mr---尿酸分子量，168.1。