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尿酸(UA)含量试剂盒(尿酸酶比色法),微板法

更新时间:2024-05-28

简要描述:

尿酸(UA)含量试剂盒(尿酸酶比色法),微板法
尿酸是嘌呤代谢的最终产物,并通过肾脏过滤排泄到尿液中。许多肾脏疾病会影响尿 酸水平,所以尿酸测定在诊断和评估肾脏疾病中具有重要作用。

尿酸(UA)含量试剂盒(尿酸酶比色法),微板法

尿酸(UA)含量试剂盒(尿酸酶比色法),微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 尿酸含量(尿酸酶法)检测试剂盒说明书 (货号:WS2021W 微板法 96 样) 一、产品简介: 尿酸是嘌呤代谢的最终产物,并通过肾脏过滤排泄到尿液中。许多肾脏疾病会影响尿 酸水平,所以尿酸测定在诊断和评估肾脏疾病中具有重要作用。 本试剂盒利用尿酸酶特异作用于尿酸,氧化产生的产物与显色剂反应呈现的(粉)红 色,该有色物质在520nm有最大吸收峰,进而计算得到尿酸含量。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 110mL×1 4℃保存 试剂一 液体 14mL×1 4℃保存 试剂二 液体 8mL×1 4℃保存 试剂三 粉体 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,再 1.1mL 的试剂一溶解备用。 标准管 粉体 mg×1 4℃保存 临用前加2mL试剂一超声*全溶 解,即0.2mg/mL尿酸溶液,再用蒸 馏水稀释2倍即0.1mg/mL备用。 三、所需仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水。 四、尿酸含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定了解本批样品情况熟悉实验流程避免实 验样本和试剂浪费1、样本制备: ① 液体样品: 澄清的液体可直接检测;若浑浊则离心后取上清液检测。 ② 组织样本: 取约 0.1g 组织样本,加 1mL 的提取液研磨,粗提液全部转移到 EP 管中,12000rpm常温离心 10min,上清液待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ③ 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。本试剂盒仅供科研使用 2 2、上机检测: ①酶标仪预热 30min,设置温度在 37℃,设定波长到 520nm②做实验前选取 2 个样本,找出适合本次检测样本的稀释倍数 D③所有试剂解冻至室温,在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 空白管 (仅做一次) 标准管 (仅做一次) 样本 10 蒸馏水 10 标准品 10 试剂一 100 100 100 试剂二 80 80 80 混匀,37℃避光孵育 5min,于 520nm 处读取吸光值 A1试剂三 10 10 10 混匀,37℃避光反应 10min520nm 处读取吸光值 A2(直到 A2 值不变),ΔA =A2-A1【注】:1. 测定管的 A 值若超过 1,可把样本再进行稀释,稀释倍数 D 代入计算公式。 2. A 的差值在零附近徘徊,可增加样本加样量 V1(如增至 40μL,则试剂一相应减少, 保持总体积不变),则改变后的 V1 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、按液体体积计算: 尿酸含量(mg/mL)=(C 标准×V )×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)÷V1×D =0.1×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)×D 尿酸含量(μmol/L)=(C 标准×V )×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)÷V1×D×106÷Mr =0.1×106÷Mr×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)×D 2、按样本鲜重计算: 尿酸含量(mg/g)=(C 标准×V )×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)÷(W×V1÷V)×D =0.1×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白) ÷W×D 3、按细胞数量计算: 尿酸含量(μg/104 cell)=(C 标准×V ) ×103×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)÷(500×V1÷V)×D =0.2×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ΔA 标准-ΔA 空白)×D C 标准---尿酸标品浓度,0.1mg/mLD---稀释倍数,未稀释即为 1V ---加入样本体积,0.01mLV1---加入样本体积,0.01mLV---提取液体积,1mLW---取样质量,g500---细胞数量,万; Mr---尿酸分子量,168.1

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