产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > > 生化试剂盒 > 磷脂酸磷酸酯酶(PPase)活性测定试剂盒

磷脂酸磷酸酯酶(PPase)活性测定试剂盒

更新时间:2024-05-24

简要描述:

磷脂酸磷酸酯酶(PPase)活性测定试剂盒
磷脂酸磷酸酯酶也称为磷酸化酶磷酸酯酶(EC 3.1.3.17,PPase)是磷酸酯酶中的一种,在脂类合成的信号传递中发挥着重要作用,其活性对含油量的提高具有重要意义,可作为育种选择高含油量品种的生化指标。

磷脂酸磷酸酯酶(PPase)活性测定试剂盒

磷脂酸磷酸酯酶(PPase)活性测定试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 磷脂酸磷酸酯酶(Phosphatidate phosphatase)活性测定试剂盒 (货号:WS2290F 分光法 48 样) 一、产品简介: 磷脂酸磷酸酯酶也称为磷酸化酶磷酸酯酶(EC 3.1.3.17PPase)是磷酸酯酶中的一种, 在脂类合成的信号传递中发挥着重要作用,其活性对含油量的提高具有重要意义,可作为 育种选择高含油量品种的生化指标。 本试剂盒利用磷脂酸磷酸酯酶(PPase)催化β-甘油磷酸分解产生无机磷分子,通过定 磷试剂测定无机磷增加速率,即可得出磷脂酸磷酸酯酶(PPase)活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 【注】:全程需无磷环境;试剂配置最好用新枪头和玻璃移液器等,也可用一次性塑料器皿,避免磷污染。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、水浴锅或恒温培养箱、 可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、磷脂酸磷酸酯酶(PPase)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 ② 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 700nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 依次在 EP 管孔板中加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 试剂一 300 300 试剂二 75 75 样本 75 35℃ 孵育 30min 试剂三 150 150 样本 75 混匀,12000rpm4℃离心 5min,上清液待测 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 液体 30mL×1 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉末全部落入底部, 加入 9mL 蒸馏水混匀溶解备用。 试剂三 液体 20mL×1 4℃保存 试剂四 A:粉体 mg×1 B:液体 6mL×1 4℃保存 临用前在试剂 A 中加 5.8mL B 液, 再加 74.2mL 的蒸馏水,混匀溶解备用。 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。本试剂盒仅供科研使用 2 ③ 显色反应,在 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中加入: 上清液 150 150 试剂四 600 600 混匀,室温静置 3min700nm 下读取各管吸光值, A=A 测定-A 对照(每个样本做一个自身对照)。 【注】若A 在零附近,可增加样本加样体积 V1(如增至 100μL,则试剂一相应减少), 或延长反应时间 T(如增至 1 小时),则改变后的 V1 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y=0.8009x - 0.0098x 是标准品浓度(μmol/mL, y A2、按蛋白浓度计算: 定义:每小时每毫克组织蛋白催化产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。 PPase 酶活力(μmol/h/mg prot)=[(A+0.0098)÷0.8009×V2] ÷(V1×Cpr)÷T =20×(A+0.0098)÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 定义:每小时每克组织催化产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。 PPase 酶活力(μmol/h/g 鲜重)=[(A+0.0098)÷0.8009×V2]÷(W×V1÷V)÷T =20×(A+0.0098)÷W 4、液体中 PPase 活力计算: 定义:每小时每毫升液体催化产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。 PPase 酶活力(μmol/h/mL)=[(A+0.0098)÷0.8009×V2]÷V1÷T=20×(A+0.0098) V---提取液体积,1mLV1---样本体积,0.075mL V2---酶促反应总体积,0.6mLT---反应时间,1/2 小时; W---样本鲜重,gCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1. 制备标准品母液(50μmol/mL):标准品用 1mL 试剂一溶解。(母液需在两天内用)。 2. 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也可根据实际样本 来调整标准品浓度。 3. 依据显色反应阶段测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
上海宇淳生物科技有限公司

上海宇淳生物科技有限公司

地址:上海市南航公路1981弄72号

版权所有:上海宇淳生物科技有限公司  备案号:沪ICP备19012414号-1  总访问量:180835  站点地图  技术支持:环保在线  管理登陆