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乙酰fu酶A羧化酶(ACC)试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-24

简要描述:

乙酰fu酶A羧化酶(ACC)试剂盒,微板法
乙酰*酶A羧化酶(ACC,EC 6.4.1.2)广泛存在于生物界。在生物体内催化乙酰*酶A羧化生成丙二酰*酶A,是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。

乙酰fu酶A羧化酶(ACC)试剂盒,微板法

乙酰fu酶A羧化酶(ACC)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 乙酰*酶 A 羧化酶(Acetyl CoA carboxylaseACC)试剂盒说明书 (货号:WS4190W 微板法 96 一、产品简介: 乙酰*酶A羧化酶(ACCEC 6.4.1.2)广泛存在于生物界。在生物体内催化乙酰*酶A 羧化生成丙二酰*酶A,是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。ACC的活性在一定 程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。 ACC催化乙酰*酶ANaHCO3ATP生成丙二酰*酶A、无机磷和ADPADP与磷酸烯 醇式丙酮酸在丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的逐一作用下,使NADH氧化为NAD+,通过检测 NADH340nm处的下降量来计算ACC的酶活力大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部,再加 1.2mL 蒸馏水充分溶解备用。 试剂二 粉剂 mg×4 -20℃保存 每支用前甩几下使试剂落入底部,再 0.55mL 的蒸馏水溶解备用。用不 完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复 冻融,三天内用完。 试剂三 粉剂 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部,再加 1.2mL 蒸馏水充分溶解备用。 试剂四 液体 15mL×1 4℃保存 试剂五 粉剂 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部,再加 1.1mL 蒸馏水充分溶解备用。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、乙酰*酶 A 羧化酶(ACC)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min,取上 清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取 ② 细胞样本: 先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细胞加入 1mL 提取液;超声波破碎 细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);4ºC 12,000rpm 10min,取上清作为待测样品。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:澄清的液体样本直接检测,若浑浊离心后取上清测定。 2、上机检测① 酶标仪预热 30min 以上,设置温度 37℃,调节波长至 340nm本试剂盒仅供科研使用 2 ② 试剂放在 37℃水浴 5min③ 在 96 孔板中依次加入: 试剂名称 测定管 样本 10 试剂一 10 试剂二 20 试剂三 10 试剂四 150 混匀,37℃下,孵育 10min 试剂五 10 混匀,37℃下,立即于 340nm 处读取吸光值 A110min 后读取 A2A=A1-A2【注】1.ΔA 过小,可以延长反应时间(如:22min 或更长)再读取 A2,或增加样本加样量 V1(如 增至 40μL,则试剂四相应减小),重新调整的反应时间 T V1 需代入计算公式重新计算。 2.A2 值小于 0.45 A 大于 0.6,则需缩短反应时间 T(如减至 12min)再读取 A2 或减少样 本量 V1(如减至 5μL,则试剂四相应增加),重新调整的反应时间 T V1 需代入计算公式重 新计算。 五、结果计算: 1、按样本蛋白浓度计算: 单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACC(nmol/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=643.1×ΔA÷Cpr 2、按样本鲜重计算: 单位定义:每克组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACC(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=643.1×ΔA÷W 3、按细胞密度计算: 单位定义:每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACC(nmol/min/104 cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(500×V1÷V)÷T=1.29×ΔA 4、按液体体积计算: 单位定义:每毫升液体样本每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACC(nmol/min/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T=643.1×ΔA ε---NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cmd---96 孔板光径,0.5cmV---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.01mLV2---反应体系总体积,2×10-4 LT---反应时间,10 minW---样本质量,g500---细胞数量; Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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