土壤漆酶(S-Lac)活性检测试剂盒,微板法

土壤漆酶(S-Lac)活性检测试剂盒,微板法

土壤漆酶(S-Lac)活性检测试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤漆酶（Soil Laccase，SL）试剂盒说明书 （货号:WS5230W 微板法 48 样） 一、产品简介： 土壤漆酶（Laccase）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，具有较强的 氧化还原能力。土壤漆酶分解底物 ABTS 产生 ABTS 自由基，在 420nm 处的吸光系数远 大于底物 ABTS，测定 ABTS 自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。 二、试剂盒组分与配制 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 25mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉剂×1 瓶 4℃保存 临用前甩几下，使粉剂落到底部， 再加 6mL 蒸馏水充分溶解，4℃ 保存一周，若变色则不能使用。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、振荡培养箱。 四、土壤漆酶活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备 取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛备用。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min，调节波长到 420nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 样本（g） 0.02 0.02 试剂一 200 300 试剂二 100 37℃振荡反应 10min，12000rpm，4℃离心 5min，分别取 上清 200μL 转移至 96 孔板中，于 420nm 处读取吸光值 A， △A=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。 【注】若△A 差值较小，可增加样本量或延长反应时间 T，则改变后的样本质量 W 和反应时间 T 则代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 酶活定义：每克土壤每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位（U）。 SL 活性(nmol/min /g 土样)=[△A÷(ε×d)×V×109]÷W÷T=1.67×△A÷W ε---ABTS 摩尔消光系数：36×103L/mol/cm； d---比色皿光径，0.5cm； V---反应总体积，0.3mL=3×10-4L； W---样本质量，g； T---反应时间，10min