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土壤几丁质酶试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-23

简要描述:

土壤几丁质酶试剂盒,微板法
多种微生物、动物、植物等都可产生几丁质酶,土壤中几丁质酶主要水解几丁质多聚体产生 N-乙酰氨基葡萄糖,该产物进一步与铁*化钾反应,于 420nm 处检测,进而计算得到土壤几丁质酶活性大小。

土壤几丁质酶试剂盒,微板法

土壤几丁质酶试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 土壤几丁质酶试剂盒说明 (货号:WS5330W 微板法 48 样) 一、产品简介: 多种微生物、动物、植物等都可产生几丁质酶,土壤中几丁质酶主要水解几丁质多 聚体产生 N-乙酰氨基葡萄糖,该产物进一步与铁氰hua钾反应,于 420nm 处检测,进 而计算得到土壤几丁质酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 25mL×1 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部, 再加 3mL 盐酸充分混匀溶解后, 再加 3mL 蒸馏水混匀备用。 试剂三 粉体 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部, 再加 1.2mL 蒸馏水溶解备用。 试剂四 液体 2mL×1 4℃保存 试剂五 液体 5mL×1 4℃保存 试剂六 粉体 g×1 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部, 再加 24mL 蒸馏水溶解备用。 标准品 粉剂×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、天平、水浴锅、低温离心机、盐酸、蒸馏水。 四、土壤几丁质酶活性测定: 1、样本制备: 取新鲜土样或 37℃烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网备用。 2、上机检测: 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 420nmEP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 土样(g0.1g 0.1g 试剂一 200 300 试剂二 100 混匀,37℃(恒温培养箱)孵育 3h4000rpm 离心 5min,取上清。 EP 管中依次加入: 上清液 150 150 试剂三 10 10 试剂四 15 15 混匀,37℃孵育 0.5h试剂五 50 50 混匀,4000rpm 离心 5min,取上清液待测。 EP 管中依次加入: 上清液 150 150本试剂盒仅供科研使用 2 试剂六 200 200 混匀,95-100℃煮沸 10min,若有沉淀,于 12000rpm 室温离心 5min200µL 上清液至 96 孔板中于 420nm 处读取各管吸光值 AΔAA 对照-A 测定(每个样本做一个自身对照)。 【注】若ΔA 较小,可以加大样本量(如增至 0.2g),或延长 37的孵育时间(由 3h 增加 5h 或更长),则改变后的样本重量 W 和反应时间 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、 标准曲线方程:y = 0.0417x + 0.0005x 是标准品质量(μg),y ΔA2、按照样本重量计算: 酶活定义:每克土壤每小时分解几丁质产生 1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个单位。 土壤几丁质酶活性(μg/h/g 土壤)=[(ΔA-0.0005)÷0.0417×3]÷W÷T=24×(ΔA-0.0005)÷W T---反应时间,3hW---样本质量,g3---体积系数; 标准品分子量---221.21附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):标准品临用前加 2mL 蒸馏水,即为 1mg/mL2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1mg/mL。也可根据 实际样本来调整标准品浓度。 3 依据第④步骤的加样体系:150μL 标准品+200μL 试剂六,混匀,95-100℃煮沸 10min200µL 96 孔板中于 420nm 处读取各管吸光值 A,标准品的质量作为横坐标,0 mg/mL 对应的 A 值减去各浓度标准品对应的 A 之差作为纵坐标,即可得出标准曲 线。

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