土壤几丁质酶试剂盒

土壤几丁质酶试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 土壤几丁质酶试剂盒说明书 （货号：WS5330F 分光法 24 样） 一、产品简介： 多种微生物、动物、植物等都可产生几丁质酶，土壤中几丁质酶主要水解几丁质多 聚体产生 N-乙酰氨基葡萄糖，该产物进一步与铁氰 hua钾反应，于 420nm 处检测，进 而计算得到土壤几丁质酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 18mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉体 mg×1 瓶 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部， 再加 1.5mL 盐酸充分混匀溶解 后，再加 1.7mL 蒸馏水混匀备用。 试剂三 粉体 mg×1 支 -20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部， 再加 1.2mL 蒸馏水溶解备用。 试剂四 液体 19mL×1 支 4℃保存 试剂五 液体 6mL×1 瓶 4℃保存 试剂六 粉体 g×1 瓶 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部， 再加 30mL 蒸馏水溶解备用。 标准品 粉剂×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、天平、水浴锅、低温离心机、盐酸、 蒸馏水。 四、土壤几丁质酶活性测定： 1、样本制备： 取新鲜土样或 37℃烘箱风干，先粗研磨，过 40 目筛网备用。 2、上机检测： ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 土样（g） 0.1g 0.1g 试剂一 300 400 试剂二 100 混匀，37℃（恒温培养箱）孵育 3h，4000rpm 离心 5min，取上清。 ③ 在 EP 管中依次加入： 上清液 200 200 试剂三 10 10 试剂四 370 370 混匀，37℃孵育 1h。 试剂五 120 120 混匀，4000rpm 离心 5min，取上清液待测。 ④ 在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用 2 上清液 360 360 试剂六 480 480 混匀，95-100℃煮沸 10min，若有沉淀，于 12000rpm 室温离心 5min， 取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿中于 420nm 处读取各管吸光值 A，ΔA＝A 对照-A 测定（每个样本做一个自身对照）。 【注】若ΔA 较小，可以加大样本量（如增至 0.2g），或延长 37℃的孵育时间（由 3h 增加 至 5h 或更长），则改变后的样本重量 W 和反应时间 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算： 1、 标准曲线方程：y = 0.0248x + 0.0024，X 是标准品质量（μg），y 是ΔA。 2、按照样本重量计算: 酶活定义：每克土壤每小时分解几丁质产生 1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个单位。 土壤几丁质酶活性(μg/h/g 土壤)=[(ΔA-0.0024)÷0.0248×3.89]÷W÷T =52.3×(ΔA-0.0024)÷W T---反应时间，3h； W---样本质量，g； 3.89---体积系数； 标准品分子量---221.21； 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（1mg/mL）：标准品临用前加 2mL 蒸馏水，即为 1mg/mL。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1mg/mL。也可根据 实际样本来调整标准品浓度。 3 依据第④步骤的加样体系：360μL 标准品+480μL 试剂六，混匀，95-100℃煮沸 10min， 取全部液体至 1mL 玻璃比色皿中于 420nm 处读取各管吸光值 A，标准品的质量作 为横坐标，0 mg/mL 对应的 A 值减去各浓度标准品对应的 A 之差作为纵坐标，即可 得出标准曲线。