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UDPG焦磷酸化酶试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-27

简要描述:

UDPG焦磷酸化酶试剂盒,微板法
UDPG 焦磷酸化酶(UGP,EC 2.7.7.9)是碳水化合物代谢的重要指标之一,广泛分布于自然界中,在微生物及动植物的许多组织中都有存在。

UDPG焦磷酸化酶试剂盒,微板法

UDPG焦磷酸化酶试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶UDP-glucose pyrophosphosphprylaseUGP剂盒说明书 (货号:WS5350W 微板法 96 样) 一、产品简介: UDPG 焦磷酸化酶(UGPEC 2.7.7.9)是碳水化合物代谢的重要指标之一,广泛 分布于自然界中,在微生物及动植物的许多组织中都有存在。催化葡萄糖活化,将 1- 磷酸葡萄糖与 UTP 分子合成为 UDP-葡萄糖(UDPG)。为各类碳水化合物包括蔗糖、 葡聚糖、纤维素、半纤维素、果胶质、糖蛋白等的合成提供葡萄糖基。 UGP 可逆催化反应生成 1 磷酸葡萄糖,在磷酸葡萄糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 作用下将 NADP 转化为 NADPH340nm 的吸光值增加速率反映了 UGP 活性。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体120mL×1 4℃保存 试剂一 液体15mL×14℃保存 试剂二 粉体×1-20℃保存 临用前加1.1mL试剂一溶解, -20℃保存。 试剂三 粉体mg×14℃保存 临用前加 5.4mL 去离子水溶解。 试剂四 粉体mg×14℃保存 临用前加 5.4mL 去离子水溶解。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、低温离心机、研钵、蒸馏水。 四、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGP)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.2g),加 1mL 提取液,进行冰浴匀浆, 12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:也可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 细胞样本: 500 万细胞加入 1mL 提取液;超声波破碎细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 1000~50001 的比例进行 提取 ③ 液体样品:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min,调节波长至 340nm,设定温度为 30℃。 ② 在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 10 试剂一 80 试剂二 10本试剂盒仅供科研使用 2 【注】1. ΔA 差值在零附近徘徊,可以延长反应时间 20min 后读取 A2,则相应的 反应时间 T 则代入计算公式重新计算; 或者加大样本上样量(如:由 10μL 增加到 20μL,则试剂一相应减少,保持 总体积 200μL 不变),改变后的加样体积即 V1 代入计算公式重新计算; 或者由 0.1g 样本取样量增加到 0.2g,加 1mL 的提取液研磨提取。 2. 若上升趋势不稳定,可以每隔 10S 读取一次吸光值,选取一段线性 上升的时间段来参与计算,相对应的 A1 A2 值也代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、按照样本蛋白浓度计算 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。 UGPnmol/min/mg prot)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T =1607.8×A÷Cpr 2)按照样本质量计算 酶活定义:每克组织每分钟消耗 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。 UGPnmol/min /g 鲜重)=[A÷(ε×d)×V2×109]÷(W ×V1÷V)÷T =1607.8×A÷W 3)按照细胞数量计算 酶活定义:每 104 个细胞每分钟消耗 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。 UGPnmol/min /104 cell= [A÷(ε×d)×V2×109]÷(500×V1÷V) ÷T =3.2×A 4)按照液体体积计算 酶活定义:每毫升液体每分钟消耗 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。 UGPnmol/min /mL=[A÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T=1607.8×A ε---NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmV---加入提取液体积,1mLV1---加入样本体积,0.01mLV2---反应体系总体积,2×10-4 Ld---96 孔板光径,0.5cmT---反应时间,4min500---细胞总数,500 万; W---样本质量,g Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 试剂三 50 轻轻混匀30℃孵育 10min试剂四 50 轻轻混匀,反应开始,1min 时在 340nm 处读取吸光值 A15min 时读取 A2,△A=A2-A1


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