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α-葡萄糖苷酶(α - GC)试剂盒,微板法

更新时间:2024-05-22

简要描述:

α-葡萄糖苷酶(α - GC)试剂盒,微板法
α-葡萄糖苷酶(α-GC,EC 3.2.1.20) 又叫α-D-葡萄糖苷水解酶,广泛分布于动植物和微生物中,是一类能够从含有α-糖苷键底物的非还原端催化水解 a-1,4-糖苷键

α-葡萄糖苷酶(α - GC)试剂盒,微板法

α-葡萄糖苷酶(α - GC)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase, α-GC)试剂盒说明书 (货号:WS1250W 微板法 48 样) 一、产品简介: α-葡萄糖苷酶(α-GCEC 3.2.1.20) 又叫α-D-葡萄糖苷水解酶,广泛分布于动植物和微生物中,是一 类能够从含有α-糖苷键底物的非还原端催化水解 a-1,4-糖苷键,释放出葡萄糖,或将游离出的葡萄糖残基 转移到另一糖类底物形成α-16 糖苷键,从而得到低聚异麦芽糖或糖酯、糖肽等物质。α-葡萄糖苷酶与 淀粉及糖原等糖代谢密切相关,对维持生物体的正常生理功能起着重要作用。 α-葡萄糖苷酶可以水解对-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基*酚,后者在 405nm 有最大吸收峰, 通过测定吸光值升高速率来计算α-葡萄糖苷酶活性。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部,再加 2.5mL 蒸馏水溶解,4℃保存。 试剂二 液体 8mL×1 4℃保存 试剂三 液体32mL×14℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本:取约 0.1g 组织(水分充足的样本取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴 匀浆。15000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 ② 细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细 胞,加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s间隔 10s,重复 30 次);15000 rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例 进行提取。 ③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 10 10 试剂一 40 蒸馏水 40 试剂二 50 50 迅速混匀,37℃保温 30min本试剂盒仅供科研使用 2 试剂三 300 300 混匀, 取 200μL 96 孔板中,405nm 处测定吸光值 AΔA=A 测定-A 对照(每个测定管需设一个对照管)。 【注】若ΔA 较小,可以增加 37℃保温反应时间(如 1 小时),或者增加样本上样量 V1(如增至 30μL则试剂二相应减少),则改变后的反应时间 T 或加样体积 V1 需重新代入计算公式计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y = 0.029x - 0.0143x PNP 摩尔质量(nmol), y 是△A2、按样本蛋白浓度计算: 定义:每毫克组织蛋白每分钟产生 1nmol -硝基*酚(PNP)定义为一个酶活性单位。 α-GC 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0143) ÷0.029]÷(V1×Cpr)÷T=114.9×(ΔA+0.0143)÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 定义:每克组织每分钟产生 1nmol -硝基*酚(PNP)定义为一个酶活性单位。 α-GC 活性(nmol/min/g 鲜重)= [(ΔA+0.0143) ÷0.029]÷(W×V1÷V)÷T=114.9×(ΔA+0.0143) ÷W 4、按细菌或细胞密度计算: 定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol -硝基*酚(PNP)定义为一个酶活性单位。 α-GC 活性(nmol/min/104cell) = [(ΔA+0.0143) ÷0.029]÷(500×V1÷V)÷T =0.23×(ΔA+0.0143) 5、按液体体积计算: 定义:每毫升样本每分钟产生 1nmol -硝基*酚(PNP)定义为一个酶活性单位。 α-GC 活性(nmol/min/mL)= [(ΔA+0.0143) ÷0.029]÷V1÷T=114.9×(ΔA+0.0143) V----加入提取液体积,1mLV1----加入反应体系中样本体积,10μL=0.01mLW----样本质量,g500----细胞或细菌总数,500 万; T----反应时间,30minPNP 对分子质量----139.11Cpr----样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 EP 管加入:10μL 标准品+40μL 蒸馏水+50μL 试剂二+300μL 试剂三,混匀,取 200μL 96 孔板中,于 405nm 下读取吸光值。 4 根据结果制作标准曲线。

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