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淀粉去分支酶(DBE)试剂盒

更新时间:2024-05-22

简要描述:

淀粉去分支酶(DBE)试剂盒
淀粉去分支酶(DBE)(EC 3.2.1.68)属于淀粉水解酶家族,特异性地水解支链淀粉的α-1,6 糖苷键,产生线性的葡萄糖链,在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。

淀粉去分支酶(DBE)试剂盒

淀粉去分支酶(DBE)试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 淀粉脱分支酶(Starch debranching enzymeDBE)试剂盒说明书 (货号:WS0450F 分光法 24 样) 一、产品简介: 淀粉去分支酶(DBE)EC 3.2.1.68)属于淀粉水解酶家族,特异性地水解支链淀粉的 α-16 糖苷键,产生线性的葡萄糖链,在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。 采用 35-二硝基水杨酸法测定 DBE 催化支链淀粉产生的还原糖,通过测定还原糖 含量的变化来得到 DBE 酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 液体 25mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下,使试剂落入底部,再加 18mL 试剂一,于 80℃水浴锅中溶解呈透 明状态,待冷却后使用。 试剂三 液体 25mL×1 4℃保存 试剂四 液体 8mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 可见分光光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调式移液器、水浴锅、台式离 心机、研钵、冰、蒸馏水 四、淀粉脱分支酶(DBE)活性检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm4℃离心 10min,取 上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 2、上机检测: 1 可见分光光光度计预热 30min 以上,调节波长到 540 nm,蒸馏水调零。 2 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 30 30 95℃煮沸 10min 的酶液) 试剂二 300 300 37℃孵育 30min 试剂三 420 420 试剂四 150 150 混匀,95℃显色 10min 后,流水冷却至室温后,全部液体转移至 1mL 玻璃比色皿中,于 540nm 处读取吸光值 AΔAA 测定-A 对照。 【注】若ΔA 差值较小,可加大样本量,或延长孵育时间至 1 小时或更长。本试剂盒仅供科研使用 2 则改变后的加样量 V1 或反应时间 T 需重新代入公式计算。 五、结果计算: 1、标准曲线:y=2.207x-0.0238x 是标准品质量(mg),y ΔA2、按照蛋白浓度计算 酶活定义:每毫克组织蛋白每小时水解支链淀粉产生 1mg 还原糖(以麦芽糖计)定义为 一个酶活力单位。 DBE 活力(mg/h/mg prot)=[ (ΔA+0.0238)÷2.207]÷(V1×Cpr)÷T =30.21× (ΔA+0.0238) ÷Cpr 3、按样本鲜重计算 酶活定义:每克组织每小时水解支链淀粉产生 1mg 还原糖(以麦芽糖计)定义为一个酶 活力单位。 DBE 活力(mg /h/g 鲜重)=[ (ΔA+0.0238)÷2.207]÷(W×V1÷V)÷T =30.21× (ΔA+0.0238) ÷W V----加入提取液体积,1 mLV1----反应中样品体积,30μL=0.03mLW----样品质量,gT----反应时间,30min=0.5hCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒; 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(50mg/mL):临用前加 1mL 蒸馏水,充分溶解混匀。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0,5,10,15,20, 25mg/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 按照测定管加样体系操作,依据结果即可制作标准曲线。

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