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β-木糖苷酶试剂盒

更新时间:2024-06-19

简要描述:

β-木糖苷酶试剂盒
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)是一类重要的木聚糖降解水解酶,存在于植物、细菌和真菌等 生物体

β-木糖苷酶试剂盒

β-木糖苷酶试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 β-木糖苷酶(β- xylosidase)活性测定试剂盒说明书 (货号:WS2170F 分光法 24 样) 一、产品简介 : β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)是一类重要的木聚糖降解水解酶,存在于植物、细菌和真菌等 生物体,主要从非还原末端把木二糖和低聚木糖催化切割为木糖单体,产物木糖可作为 碳源应用于微生物发酵。另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比 传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。 β-木糖苷酶催化对硝基*酚-β-D-木糖苷产生对硝基*酚(PNP),该产物在 405nm 有特征吸收峰,通过测定 405nm 光吸收增加速率,即可计算β-木糖苷酶活性。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部, 再加 2mL 蒸馏水溶解备用。 试剂二 液体 6mL×1 4℃保存 试剂三 27mL×1 4℃保存 标准品 粉剂×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调式移液器、低温离心机、天平、 研钵、冰和蒸馏水。 四、β-木糖苷酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本的制备: ① 组织样本:取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰 浴匀浆。12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)1:5~10 比例提取。 ② 细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细 胞,加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】若增加样本量,可按照细菌或细胞数量(104 ):提取液体积(mL)500~1000:1 的比例提取。 ③ 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 可见分光光度计预热 30min,调节波长至 405nm,蒸馏水调零。 ② 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 60 60 试剂一 75 蒸馏水 75 试剂二 105 105 迅速混匀,45℃保温 20min 试剂三 540 540 混匀, 取全部澄清液体转移至 1mL 玻璃比色皿中,于 405nm 处测定吸光值 AΔA=A 测定-A 对照(每个测定本试剂盒仅供科研使用 2 管需设一个对照管)。 【注】:若ΔA 低于 0.01,可增加样本取样量 V1(如增至 120μL,则试剂三相应减 少),或延长保温时间(如:40min 或更长),或增加样本质量 W,则改变后 V1 T W 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y=0.0211x-0.0004x 为标准品摩尔质量(nmol),y ΔA2、按蛋白浓度计算: 定义:45℃下,每毫克蛋白每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1×Cpr)÷T =39.5×(ΔA+0.0004)÷ Cpr 3、按样本质量计算: 定义:45℃下,每克组织每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1÷V×W)÷T =39.5×(ΔA+0.0004)÷W 4、按细胞数量计算: 定义:45℃下,每 104个细胞每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一酶活单位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1÷V×细胞数量)÷T =39.5×(ΔA+0.0004)÷细胞数量 5、按液体体积计算: 定义:45℃下,每毫升液体每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚(PNP)为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷V1÷T =39.5×(ΔA+0.0004) V---加入提取液体积,1mLV1---加入反应体系中样本体积,60μL=0.06mLW---样本质量,g500---细胞或细菌总数,500 万; T---反应时间,20minPNP 对分子质量---139.11Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒; 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(1mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25 mg/mL。也可根据 实际样本来调整标准品浓度。 3 EP 管加入:60μL 标准品+75μL 蒸馏水+105μL 试剂二+540μL 试剂三,混匀,取 全部澄清液体转移至 1mL 玻璃比色皿中,于 405nm 下读取吸光值。 4 根据结果制作标准曲线。

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