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乙醇酸氧化酶(GO)试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-17

简要描述:

乙醇酸氧化酶(GO)试剂盒,微板法
乙醇酸氧化酶(GO,EC 1.3.3.1)是植物光呼吸过程中的关键酶,它催化乙醇酸氧化生 成乙醛酸,即植物光呼吸的底物。

乙醇酸氧化酶(GO)试剂盒,微板法

乙醇酸氧化酶(GO)试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 乙醇酸氧化酶活性测定试剂盒说明书 (货号:WS0160W 微板法 96 样) 一、产品简介: 乙醇酸氧化酶(GOEC 1.3.3.1)是植物光呼吸过程中的关键酶,它催化乙醇酸氧化生 成乙醛酸,即植物光呼吸的底物。乙醇酸氧化酶与植物光呼吸、生长发育、矿质营养及感 病等密切相关。 乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化成乙醛酸,生成的乙醛酸与苯肼反应生成乙醛酸苯腙。乙 醛酸苯腙 324nm 处有最大吸收峰,通过测定乙醛酸苯腙的增加量,即可得出乙醇酸氧化 酶的酶活大小。 二、测试盒组成和配制: 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板(UV 板)、低温离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、乙醇酸氧化酶(GO)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min,取上 清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。 2、上机检测① 酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 324nm② 所有试剂解冻至室温(25℃)。 ③ 为了减少操作误差,建议使用排枪。 ④ 依次在 96 孔板中加入: 【注】1. 加完试剂二即启动反应,所以试剂二加完混匀后立即检测,若 A2 值大于 1.5,可对样本进行稀 释,稀释倍数需代入公式重新计算。 2. ΔA小于0.005,可增大样本量V1(如增至20μL,提取液相应减少),或延长反应时间T(如 增至10min或更长),则改变后的V1和反应时间T需代入公式重新计算。 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 120mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 -20℃保存 临用前甩几下或离心,使粉体落入底 部,再加 2.6mL 蒸馏水混匀备用 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下或离心,使液体落入底 部,再加 2.5mL 蒸馏水混匀备用 试剂名称(μL测定管 样本 10 试剂一 20 提取液 150 试剂二 20 混匀,立即324nm 处读取 A1 值,室温(25℃)反应 3min 后读取 A2 值。ΔA=A2-A1本试剂盒仅供科研使用 2 五、结果计算: 1、按质量计算: 酶活定义:每克组织每分钟催化生成 1nmol 的乙醛酸苯腙定义为一个酶活单位。 GO(nmol/g/min)=[ΔA÷(ε×d)×V2×103]÷(V1÷V×W)÷T×D=784.3×ΔA÷W×D 2、按蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克蛋白每分钟催化生成 1nmol 的乙醛酸苯腙定义为一个酶活单位。 GO(nmol/mg/min)=[ΔA÷(ε×d)×V2×103]÷(V1×Cpr)÷T×D=784.3×ΔA÷Cpr×D ε---乙醛酸苯腙的摩尔吸光系数为17.0mL/μmol/cmd---光径距离,0.5cmV2---反应总体积,0.2mLV1---样本上样量,0.01mLV---提取液体积,1mLW---样本鲜质量,gT---反应时间,3minD---稀释倍数,若未稀释则 D 值为 1

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