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糖化酶/葡萄糖淀fen酶试剂盒

更新时间:2024-06-14

简要描述:

糖化酶/葡萄糖淀fen酶试剂盒
糖化酶,又称葡萄糖淀粉fen酶(EC 3.2.1.3),是一种外切型糖苷酶,它从淀粉的非还原性 末端水解α-1,4 糖苷键和α-1,6 糖苷键

糖化酶/葡萄糖淀fen酶试剂盒

糖化酶/葡萄糖淀fen酶试剂盒

本试剂盒仅供科研使用 1 糖化酶(Glucoamylase)试剂盒说明书 (货号:WS9650F 分光法 24 样) 一、产品简介: 糖化酶,又称葡萄糖淀粉fen酶(EC 3.2.1.3),是一种外切型糖苷酶,它从淀粉的非还原性 末端水解α-1,4 糖苷键和α-1,6 糖苷键,将淀粉*全水解为葡萄糖,因此广泛的应用于酒精、 白酒、抗生素、氨基酸、有机酸,甘油,淀粉糖等工业中,是我国重要的工业酶制剂之一。 糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖,与 3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物,在 540nm 处有最大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比,可测定计算得糖化 酶的活力。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 粉体 mg×1 4℃保存 临用前用提取液于 80水浴溶 解,并定容至 10mL试剂二 液体 30mL×1 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液 器、研钵、冰。 四、糖化酶活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min,取上 清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取 ② 细胞样本: 先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细胞加入 1mL 提取液;超声波破 碎细胞(冰浴,功率 20%200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);4ºC 12,000rpm 离心 10min,取上清作为待测样品。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。 2、上机检测① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温; ③ 在 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管本试剂盒仅供科研使用 2 样本 30 煮沸样本 30 试剂一 300 300 充分混匀,40℃反应 20min 试剂二 600 600 混匀,沸水浴(95-100℃)5min,流水冷却后,全部转移 1mL 玻璃比色皿中,于 540nm 处读取吸光值 A,△A=A 测定-A 对照(每个样本自身需做一个自身对照)。 【注】:1. ΔA 过小,可以延长 40反应时间 T(如:40min 或更长),或增加样本量 V1(如增至 60μL,则试剂二相应减小),重新调整的反应时间 T V1 需代入计算公式重新计算。 2. A 值大于 1.8,可缩减 40反应时间 T(如:10min 或更短),或减少样本量 V1(如减 10μL,则试剂二相应增加),重新调整的反应时间 T V1 需代入计算公式重新计算 五、结果计算: 1、标准曲线方程:y= 0.0139x-0.0443x 是标准品质量(μg),y ΔA2、按样本蛋白浓度计算: 定义:每毫克组织蛋白每分钟分解可溶性淀粉产生 1μg 葡萄糖所需酶量为一个酶活单位。 糖化酶活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA+0.0443)÷0.0139]÷(V1×Cpr) ÷T=119.9×(ΔA+0.0443)÷Cpr 3、按样本鲜重计算: 定义:每克组织每分钟分解可溶性淀粉产生 1μg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。 糖化酶活性(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0443)÷0.0139]÷(W×V1÷V) ÷T=119.9×(ΔA+0.0443)÷W 4、按细胞数量计算: 定义:104个细胞每分钟分解可溶性淀粉产生 1μg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。 糖化酶活性(nmol /min /104 cell)=[(ΔA+0.0443)÷0.0139]÷(500×V1÷V)÷T=0.24×(A+0.0443) 5、按照液体体积计算: 定义:每毫升液体每分钟分解可溶性淀粉产生 1μg 葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。 糖化酶活性(nmol /min /104 cell)=[(ΔA+0.0443)÷0.0139]÷V1÷T=119.9×(ΔA+0.0443) V---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.03 mLW---样本质量,gT---反应时间,20minCpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(4mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水(母液需在两天 内用且-20℃保存)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.8, 1.6, 2.4, 3.2, 4 mg/mL。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

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