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糖原含量试剂盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

更新时间:2024-06-13

简要描述:

糖原含量试剂盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法
糖原是由葡萄糖分子通过糖苷键聚合而成的高分子物质,作为重要的能源物质储存于肝 脏、肌肉和脑等重要器官。

糖原含量试剂盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

糖原含量试剂盒(硫酸-蒽酮比色法)微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 糖原含量测定说明书 (货号:WS1650W 微板法 96 样) 一、产品简介: 糖原是由葡萄糖分子通过糖苷键聚合而成的高分子物质,作为重要的能源物质储存于肝 脏、肌肉和脑等重要器官。糖原的储存或代谢异常可引起多种疾病,因此测定糖原含量的 变化,对研究糖原代谢及相关疾病有着重要的意义。 采用蒽酮法:即利用强碱性提取液提取糖原,浓硫酸是糖原脱水生产糖醛衍生物,糖醛 类与蒽酮作用,在 620nm 处有最大吸收峰,再与相同方法处理的葡萄糖标准液比色定量。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×2 4℃保存 用前每瓶甩几下使粉剂落入底部,再加 10mL 浓硫酸,充分溶解混匀后使用;用 不完的试剂 4℃保存 4-5 天。 标准品 粉剂 mg×1 4℃保存 从标准管中称量取出 2mg 至一新 EP 中,再加 2mL 葡萄糖标准品溶液, 蒸馏水溶解即 再稀释 1mg/mL 50 0.02mg/mL 标准品备用。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、浓硫酸(不允许快递)和蒸馏水。 四、糖原含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、检测液制备: 按照肝脏/肌肉样本质量(g):提取液体积(mL)13 的比例加入提取液(如取 0.1g 组织,加 0.3mL 提取液),盖紧管盖(用封口膜封口)95℃水解 20min,室温冷却 后即为糖原水解液。 ①肝糖原检测液:在冷却后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸馏水混匀总体积约 1mL8000rpm 室温离心 5min,取上清液 100μL 至新 EP 管中,再加 900μL 蒸馏水即上清 液稀释 10 倍后作为检测液测定。 ②肌糖原检测液:在冷却后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸馏水混匀总体积约 1mL8000rpm 室温离心 5min,取上清液 200μL 至新 EP 管中,再加 200μL 蒸馏水即上清 液稀释 2 倍后作为检测液测定。 ③糖原含量低的组织样本:在冷却后的糖原水解液 EP 管中加入 0.7mL 蒸馏水混匀总体 积约 1mL8000rpm 室温离心 5min,取上清液作为检测液测定。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 620nm,所有试剂解冻至室温(25℃)。 ② 在 EP 管中依次加入:本试剂盒仅供科研使用 2 【注】若 A 测定管值在零附近,可以增加测定管上样量 V 检测液(如增至 40μL),蒸 馏水相应减少,则改变后的 V 检测液代入计算公式计算。 五、结果计算: 糖原含量(mg/g)=(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×(C 标准×V )÷(V 检测液÷V×W)÷1.11×D =0.0018×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(V 检测液÷V×W)×D V ---0.1mLV 检测液---0.01mLW--取样量,gV---提取液总体积,1mLC 标准---标准品浓度,0.02mg/mLD---样本测试前稀释倍数,肝糖原 D 值为 10,肌糖原 D 值为 21.11---是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数。 试剂名称 μL空白管 (只做一次) 标准管 (只做一次) 测定管 蒸馏水 100 90 标准液 100 检测液 10 试剂一 200 200 200 混匀,置 95℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),冷却, 200μL 转移至 96 孔板中,于 620nm 读取吸光值 A

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