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山li醇氧化酶(SOX)测定试剂盒,微板法

更新时间:2024-06-13

简要描述:

山li醇氧化酶(SOX)测定试剂盒,微板法
山*醇作为一种运输糖,被卸载到果实中时转化成其他糖类物质,山*醇氧化酶 (sorbitol oxidase,SOX)就是山*醇转化和利用过程中的关键酶之一

山li醇氧化酶(SOX)测定试剂盒,微板法

山li醇氧化酶(SOX)测定试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 山*醇氧化酶(SOX)测定试剂盒说明书 (货号:WS2750W 微板法 48 样) 一、产品简介: 山*醇作为一种运输糖,被卸载到果实中时转化成其他糖类物质,山*醇氧化酶 sorbitol oxidaseSOX)就是山*醇转化和利用过程中的关键酶之一,该酶与果实的 品质以及果实中糖类物质的积累密切相关。 山*醇氧化酶(SOX)催化山*醇生成葡萄糖,葡萄糖进一步与 3,5-二硝基水杨酸 反应,生成棕红色氨基化合物,经光谱扫描在 540nm 有特征光吸收,在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与山*醇氧化酶(SOX)活性成正比。 二、试剂盒的组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 4℃保存 试剂一 液体 7mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 4℃保存 用前加入 2.5mL 蒸馏水充分溶解 备用;用不完的试剂 4℃保存; 试剂三 液体 10mL×1 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 4℃保存 若重新做标曲,则用到该试剂 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、山*醇氧化酶(SOX)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 1、样本制备: 称样本 0.1g(水分充足的样本可取 0.5g)于研钵中,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆后 转入离心管中。12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取 2、上机检测: 1 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm2 EP 管中依次加入: 试剂名称(μL测定管 对照管 样本 20 20 试剂一 60 80 试剂二 20 混匀,30℃(水浴锅或恒温培养箱)下孵育 30min 试剂三 100 100 混匀,沸水浴(95-100℃)(可用封口膜缠紧 EP 管)5min流水冷却 蒸馏水 200 200 混匀,取出 200μL 96 孔板中,于 540nm 处读取吸光值 AA=A 测定-A 对照(每个样本自身需做一个自身对照)。 【注】:1.若吸光值大于 1.8,可减少样本加样量 V1(如减至 10μL,则试剂一相应增加),则改 变后的加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 2.ΔA 值在零附近徘徊,可延长 30℃水浴时间(如增至 60min),则改变后的反应时间 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算: 1、标准曲线方程为 y = 0.0125x - 0.0338x 为标准品质量(μg),y ΔA2、按蛋白浓度计算: 单位定义:37℃每毫克蛋白每分钟产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活性单位。 山*醇氧化酶(SOX)(μg/min/mg prot=[(ΔA+0.0338) ÷0.0125]÷(V1×Cpr ) ÷T =133.3×(ΔA+0.0338) ÷Cpr 3、按鲜重计算: 单位的定义:37℃每克组织每分钟产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活性单位。 山*醇氧化酶(SOX)(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0338) ÷0.0125]÷(W×V1÷V) ÷T =133.3×(ΔA+0.0338)÷W V----加入提取液体积,1mLV1----加入反应体系中样本体积,0.02mLT----反应时间,30minW----样本鲜重,gCpr----样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒; 附:标准曲线制作过程: 1 制备标准品母液(5mg/mL):向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水(母液需在两天 内用且-20℃保存)。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 按照测定管的加样顺序依次加样操作,根据结果即可制作标准曲线。

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