产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > 生化试剂盒 > 微板法 > NAD+-山li醇脱氢酶(NAD+-SDH)试剂盒微板法

NAD+-山li醇脱氢酶(NAD+-SDH)试剂盒微板法

更新时间:2024-06-13

简要描述:

NAD+-山li醇脱氢酶(NAD+-SDH)试剂盒微板法
山*醇脱氢酶(sorbitol dehydrogenase,SDH)催化山*醇脱氢生成果糖,是调控 生物体内山*醇含量的关健酶之一

NAD+-山li醇脱氢酶(NAD+-SDH)试剂盒微板法

NAD+-山li醇脱氢酶(NAD+-SDH)试剂盒微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 NAD+ -山*醇脱氢酶活性测定试剂盒说明书 (货号:WS9550W 微板法 96 样) 一、产品简介: 山*醇脱氢酶(sorbitol dehydrogenaseSDH催化山*醇脱氢生成果糖,是调控 生物体内山*醇含量的关健酶之一,依据依赖的辅酶分为 NAD+依懒性山*醇脱氢酶 NAD+ -SDHEC 1.1.1.14)和 NADP+依懒性山*醇脱氢酶(NADP+ -SDH), NAD+ -SDH 催化山*醇转化成果糖,NADP+ -SDH 催化山*醇转化成葡萄糖。 NAD+ -SDH 催化山*醇脱氢生成果糖,同时还原 NAD+生成 NADH,测定 340nm 吸光度增加速率可以计算 NAD+ -SDH 酶活性大小。 二、试剂盒组成和配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100mL×1 4℃保存 试剂一 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部, 再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。 试剂二 液体 20mL×1 4℃保存 试剂三 粉剂 mg×1 4℃保存 临用前甩几下使粉剂落入底部, 再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。 三、所需的仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、NAD+ -山*醇脱氢酶(NAD+ -SDH)活性测定: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实 验样本和试剂浪费! 1、样本制备: ① 组织样本: 称取约 0.1g 组织(水分充足样本可取 0.5g 组织),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 12000rpm 4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。 【注意】 若样本颜色较深(如植物叶片),可引起起始值 A1 值较大如超过 1.6,可在样本制备过程中 增加除色素步骤:取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 80%乙醇冰浴匀浆,12000rpm4离心 10min,弃掉色素较深的上清液;以上除色素步骤重复 2 次。最后向离心得到的沉淀中加入 1mL 提取液,混匀或再次冰浴匀浆,12000rpm4离心 10min,取上清置冰上待测。 ② 细菌/细胞样本: 先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取 液;超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);4ºC 12,000rpm 离心 10min,取上清作为待测样品。 【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。 3 液体样本:澄清的液体样本直接检测;若浑浊离心后取上清检测。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,设置温度 25,调节波长至 340nm② 所有试剂放在 30℃水浴 5min③ 在 96 孔板中依次加入: 试剂名称(μL测定管 样本 20本试剂盒仅供科研使用 2 试剂一 10 试剂二 160 混匀,25℃下孵育 10min 试剂三 10 混匀,25℃下,20s 时于 340nm 处读取 A120min 后读取 A2ΔA=A2-A1【注】: 若ΔA 过小,可以延长反应时间(如:40min 或更长)再读取 A2,或加大样本体积 V1 (如增至 40μL,则试剂二相应减少),重新调整的反应时间 T 和加样体积 V1 需代入 计算公式重新计算。 五、结果计算: 1. 按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 NAD+ -SDHnmol/min/mg prot=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(V1×Cpr) ÷T=160.8×ΔA÷Cpr 2. 按样本鲜重计算: 酶活定义:每克组织每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 NAD+ -SDHnmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(W×V1÷V) ÷T=160.8×ΔA÷W 3. 按细菌或细胞密度计算: 酶活定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 NAD+ -SDHnmol/min/104 cell=[ΔA×V2÷ε×d×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.32×ΔA 4. 按照液体体积计算 酶活定义:每毫升液体每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 NAD+ -SDHnmol/min/mL= [ΔA×V2÷ε×d×109]÷V1÷T=160.8×ΔA ε---NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cmd---96 孔板光径,0.5cmV---加入提取液体积,1 mLV1---加入样本体积,0.02 mLV2---反应体系总体积,2×10-4 LT---反应时间,20 min500---细菌或细胞总数,500 万; W---样本质量; Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
上海宇淳生物科技有限公司

上海宇淳生物科技有限公司

地址:上海市南航公路1981弄72号

版权所有:上海宇淳生物科技有限公司  备案号:  总访问量:185987  站点地图  技术支持:环保在线  管理登陆