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蔗糖含量试剂盒(蒽酮比色法),微板法

更新时间:2024-06-13

简要描述:

蔗糖含量试剂盒(蒽酮比色法),微板法
蔗糖是光合作用的主要产物,广泛分布于植物体内,特别是甜菜、甘蔗和水果中含量*高。蔗糖由葡萄糖和糖脱水缩合形成

蔗糖含量试剂盒(蒽酮比色法),微板法

蔗糖含量试剂盒(蒽酮比色法),微板法

 蔗糖(sucrose)含量(蒽酮比色法)试剂盒说明书 (货号:G0506W 微板法 96 样) 一、产品简介: 蔗糖是光合作用的主要产物,广泛分布于植物体内,特别是甜菜、甘蔗和水果中含量*高。蔗糖由葡萄糖和糖脱水缩合形成,易溶于水较难溶于乙醇。 在酸性条件下,将蔗糖水解生成果糖和葡萄糖,采用蒽酮比色法,生成的产物在 620nm 下有特征吸收峰,进而计算出蔗糖的含量。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 1mL×1 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×2 4℃保存 标准品 粉剂×1 4℃保存 临用前称量取出2mg标准品至 一新EP管中,再加2mL蒸馏水 溶解即1mg/mL标准品,再用蒸 馏水稀释一倍得0.5mg/mL蔗 糖标准品溶液,备用(现配现 用,三天内用完)。 三、所需仪器和用品: 酶标仪、96 孔板、水浴锅、移液器、研钵、常温离心机、乙醇浓硫酸、蒸馏水。 四、蔗糖含量检测: 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验 样本和试剂浪费! 建议:选取样本做几个梯度的稀释,选取适合本次实验的稀释倍数 D。 1、样本制备 ① 组织样本: 称取 0.1g 样本(若是干样,如烘干烟叶等可取 0.05g;若是水分充足的样本可取 0.2g), 先加入 0.8mL 80%乙醇(自备:取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸馏水中),冰浴匀浆,倒入 有盖离心管中,再用 80%乙醇冲洗研钵并转移至同一 EP 管中,使 EP 管中粗提液终体积 定容为 1.5mL(若用自动研磨机可直接加入 1.5mL 80%乙醇研磨);置 50℃水浴 20min (封口膜缠紧,防止液体散失,且间隔 2min 振荡混匀一次),冷却后(若有损失,可加 80%乙醇补齐至 1.5mL),12000rpm,室温离心 10min,取上清液备用。 ② 液体样本: 澄清的液体样本直接检测,若浑浊则需 12000rpm,室温离心 10min,取上清液备用。 2、上机检测: ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 620nm② 调节水浴锅至 95℃,工作液的配制:临用前在一瓶试剂二中加入 2.75mL 蒸馏水后, 缓慢加入 7.25mL 浓硫酸,充分溶解(若难溶解,70℃加热溶解;剩余试剂 4℃保存 一周)。 ③ 上清液稀释:可先取 2 个样本预测,确定适合本批样本的稀释浓度 D:叶片类样 本可稀释 10 倍,含糖量高的果肉类样本可稀释 20 倍左右。 ④ 在 EP 管中依次加入: 试剂(μL) 测定管 标准管 (仅做一次) 空白管 (仅做一次) 样本 20 标准品 20 蒸馏水 20 试剂一 10 10 10 务必混匀(可用枪吸打混匀),95℃煮沸 10min(盖紧, 防止水分散失) 工作液 180 180 180 混匀,95℃水浴 10min(封口膜缠紧,防止水分散失), 冷却至室温后,取 200μL 转移至 96 孔板中,于 620nm 读取吸光值 AΔA=A 测定管-A 空白管。 【注】:如果ΔA 大于 1,需要将样本用蒸馏水稀释(严禁稀释加热反应后的混合液, 否则会出现浑浊现象),计算公式中乘以相应稀释倍数 D五、结果计算: 1、按照重量计算: 蔗糖含量(mg/g 重量)=(C 标准×V1)×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V)×D =0.75×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷W×D 2、按照体积计算: 蔗糖含量(mg/mL 液体)=(C 标准×V1)×ΔA÷(A 标准-A 空白)÷V1×D =0.5×ΔA÷(A 标准-A 空白)×D C 标准---蔗糖标准品浓度,0.5mg/mLD---稀释倍数,未稀释即为 1V---加入提取液体积,1.5mLV1---加入样本体积,0.02mLW---样本鲜重,g

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